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海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备
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海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备
论文目录
中文摘要
第1-8 页
ABSTRACT
第8-10 页
缩略词
第10-11 页
1 引言
第11-22 页
· 金属硫蛋白研究进展
第11-13 页
· 植物MT的分类
第13-14 页
· 植物金属硫蛋白的特征
第14-15 页
· 植物金属硫蛋白的性质
第14 页
· 植物金属硫蛋白的结构
第14-15 页
· 植物金属硫蛋白的分子生物学特性
第15-17 页
· 植物金属硫蛋白基因特异性表达
第17-18 页
· 植物金属硫蛋白的功能
第18-22 页
· 参与金属离子的运输和供给
第19 页
· 解除金属离子的毒害及维持细胞内环境的稳定
第19-20 页
· 植物金属硫蛋白与活性氧清除
第20-21 页
· 植物金属硫蛋白在基因工程中的应用
第21-22 页
· 结语与展望
第22 页
2 实验目的与意义
第22-23 页
3 材料与方法
第23-37 页
· 质粒、菌株、动物
第23 页
· 主要试剂
第23 页
· 常用缓冲液、试剂和培养基
第23-26 页
· 细菌培养相关试剂
第23-24 页
· SDS-PAGE电泳相关试剂
第24 页
· 菌细胞裂解及蛋白纯化相关试剂
第24-25 页
· ELISA实验相关试剂
第25-26 页
· Western-blot相关试剂
第26 页
· 主要仪器
第26 页
· pGEX-2T-EhMT1融合表达载体的构建
第26-31 页
· 引物设计
第26 页
· 大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)
第26-28 页
· EhMT1片段的PCR扩增及产物回收
第28-29 页
· 回收产物与克隆载体pGEM-T easy vector的连接反应
第29 页
· 连接产物的转化及克隆鉴定
第29-30 页
· 质粒DNA的抽提
第30 页
· 表达载体的构建
第30-31 页
· EhMT1基因的原核表达鉴定
第31-33 页
· 重组质粒pGEX-2T-EhMT1的诱导表达
第31-33 页
· GST-EhMT1融合蛋白表达形式分析
第33 页
· GST-EhMT1融合蛋白表达条件优化
第33 页
· GST-EhMT1融合蛋白的纯化
第33-35 页
· GST-EhMT1融合蛋白的大量表达
第33-34 页
· 融合蛋白的亲和层析
第34 页
· 纯化后的融合蛋白浓度测定(Brandford法)
第34-35 页
· 融合蛋白的凝胶纯化
第35 页
· GST-EhMT1融合蛋白多克隆抗体的制备
第35-37 页
· 免疫实验
第35 页
· 抗体效价的ELISA检测
第35-36 页
· Western blotting检测抗体的特异性
第36-37 页
4 结果与分析
第37-44 页
· pGEX-2T-EhMT1融合表达载体的构建
第37-39 页
· EhMT1片段的PCR扩增及产物回收
第37 页
· 重组质粒pGEM-T-EhMT1的阳性鉴定
第37-38 页
· 重组质粒pGEX-2T-EhMT1的阳性鉴定
第38-39 页
· 融合蛋白GST-EhMT1的原核表达
第39-43 页
· EhMT1基因的原核表达鉴定
第39-40 页
· 融合蛋白表达形式鉴定
第40 页
· 原核表达条件的优化
第40-42 页
· GST-EhMT1大量表达与纯化
第42-43 页
· GST-EhMT1多克隆抗体的制备
第43-44 页
· 抗血清效价的测定
第43 页
· 抗体特异性的测定
第43-44 页
5 讨论
第44-49 页
· pGEX-2T-EhMT1融合表达体系的构建
第44-47 页
· 表达载体的构建
第44-46 页
· 表达条件的优化
第46-47 页
· 多克隆抗体的制备
第47-49 页
参考文献
第49-57 页
致谢
第57-58 页
附件
第58 页
本篇论文共
58
页,
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