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海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备

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海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备
论文目录
 
中文摘要第1-8 页
ABSTRACT第8-10 页
缩略词第10-11 页
1 引言第11-22 页
  · 金属硫蛋白研究进展第11-13 页
  · 植物MT的分类第13-14 页
  · 植物金属硫蛋白的特征第14-15 页
    · 植物金属硫蛋白的性质第14 页
    · 植物金属硫蛋白的结构第14-15 页
  · 植物金属硫蛋白的分子生物学特性第15-17 页
  · 植物金属硫蛋白基因特异性表达第17-18 页
  · 植物金属硫蛋白的功能第18-22 页
    · 参与金属离子的运输和供给第19 页
    · 解除金属离子的毒害及维持细胞内环境的稳定第19-20 页
    · 植物金属硫蛋白与活性氧清除第20-21 页
    · 植物金属硫蛋白在基因工程中的应用第21-22 页
  · 结语与展望第22 页
2 实验目的与意义第22-23 页
3 材料与方法第23-37 页
  · 质粒、菌株、动物第23 页
  · 主要试剂第23 页
  · 常用缓冲液、试剂和培养基第23-26 页
    · 细菌培养相关试剂第23-24 页
    · SDS-PAGE电泳相关试剂第24 页
    · 菌细胞裂解及蛋白纯化相关试剂第24-25 页
    · ELISA实验相关试剂第25-26 页
    · Western-blot相关试剂第26 页
  · 主要仪器第26 页
  · pGEX-2T-EhMT1融合表达载体的构建第26-31 页
    · 引物设计第26 页
    · 大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)第26-28 页
    · EhMT1片段的PCR扩增及产物回收第28-29 页
    · 回收产物与克隆载体pGEM-T easy vector的连接反应第29 页
    · 连接产物的转化及克隆鉴定第29-30 页
    · 质粒DNA的抽提第30 页
    · 表达载体的构建第30-31 页
  · EhMT1基因的原核表达鉴定第31-33 页
    · 重组质粒pGEX-2T-EhMT1的诱导表达第31-33 页
    · GST-EhMT1融合蛋白表达形式分析第33 页
    · GST-EhMT1融合蛋白表达条件优化第33 页
  · GST-EhMT1融合蛋白的纯化第33-35 页
    · GST-EhMT1融合蛋白的大量表达第33-34 页
    · 融合蛋白的亲和层析第34 页
    · 纯化后的融合蛋白浓度测定(Brandford法)第34-35 页
    · 融合蛋白的凝胶纯化第35 页
  · GST-EhMT1融合蛋白多克隆抗体的制备第35-37 页
    · 免疫实验第35 页
    · 抗体效价的ELISA检测第35-36 页
    · Western blotting检测抗体的特异性第36-37 页
4 结果与分析第37-44 页
  · pGEX-2T-EhMT1融合表达载体的构建第37-39 页
    · EhMT1片段的PCR扩增及产物回收第37 页
    · 重组质粒pGEM-T-EhMT1的阳性鉴定第37-38 页
    · 重组质粒pGEX-2T-EhMT1的阳性鉴定第38-39 页
  · 融合蛋白GST-EhMT1的原核表达第39-43 页
    · EhMT1基因的原核表达鉴定第39-40 页
    · 融合蛋白表达形式鉴定第40 页
    · 原核表达条件的优化第40-42 页
    · GST-EhMT1大量表达与纯化第42-43 页
  · GST-EhMT1多克隆抗体的制备第43-44 页
    · 抗血清效价的测定第43 页
    · 抗体特异性的测定第43-44 页
5 讨论第44-49 页
  · pGEX-2T-EhMT1融合表达体系的构建第44-47 页
    · 表达载体的构建第44-46 页
    · 表达条件的优化第46-47 页
  · 多克隆抗体的制备第47-49 页
参考文献第49-57 页
致谢第57-58 页
附件第58 页

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