论文目录 | |
中文摘要 | 第1-5
页 |
Abstract | 第5-14
页 |
第1章 引言 | 第14-27
页 |
· 研究的背景、目的及意义 | 第14-17
页 |
· MHC I 类分子 | 第14
页 |
· MHC I 类分子的结构 | 第14-16
页 |
· 重链 | 第14-15
页 |
· 轻链 | 第15-16
页 |
· MHC I 类分子的生物学功能 | 第16-17
页 |
· 参与对抗原处理 | 第16
页 |
· 约束免疫细胞间相互作用 | 第16
页 |
· 参与对免疫应答的遗传控制 | 第16-17
页 |
· 诱导自身或同种淋巴细胞反应 | 第17
页 |
· 参与T 细胞分化过程 | 第17
页 |
· 研究的目的与意义 | 第17
页 |
· 国内外标记蛋白方法的研究现状 | 第17-22
页 |
· 荧光蛋白标记 | 第17-18
页 |
· Tetracysteine tag 标记 | 第18-19
页 |
· SNAP tag 标记 | 第19-20
页 |
· Halo Tag 标记 | 第20-22
页 |
· 研究目标、内容、拟解决的关键问题、实验方法和技术路线 | 第22-27
页 |
· 研究目标 | 第22-23
页 |
· 研究内容 | 第23
页 |
· 拟解决的关键问题 | 第23
页 |
· 研究方法及技术路线 | 第23-27
页 |
第2章 TCtag 和halotag 特异性标记 MHC I 类分子 | 第27-42
页 |
· 实验材料 | 第27-28
页 |
· 主要实验材料 | 第27
页 |
· 主要试剂 | 第27
页 |
· 主要实验设备 | 第27-28
页 |
· 主要试剂的配制 | 第28
页 |
· 实验方法 | 第28-38
页 |
· 表达MHC-I 类分子-FUkbEGFPTCtag 融合蛋白载体的构建 | 第28-32
页 |
· Bgl II 和 BsrG I 酶切质粒载体pKE2 | 第28-29
页 |
· 酶切片断kbEGFP 的回收 | 第29
页 |
· BamH I 和 BsrG I 酶切质粒载体FUIEalphaEGFPTCtag | 第29
页 |
· 酶切载体FUTCtag 的回收 | 第29
页 |
· 连接 | 第29-30
页 |
· 连接产物转化 | 第30
页 |
· 挑选克隆、摇菌、提质粒 | 第30-31
页 |
· 阳性克隆的鉴定 | 第31
页 |
· 质粒电泳 | 第31-32
页 |
· 测序鉴定 | 第32
页 |
· 表达MHC-I 类分子-FUkbhalotag 融合蛋白载体的构建 | 第32-35
页 |
· PCR 扩增halotag 的引物序列设计 | 第32
页 |
· PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第32-33
页 |
· Age I 和 BsrG I 酶切PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第33
页 |
· 酶切载体的回收 | 第33-34
页 |
· Age I 和 BsrG I 酶切FUKY 载体 | 第34
页 |
· 连接 | 第34
页 |
· 连接产物转化 | 第34-35
页 |
· 阳性克隆的鉴定 | 第35
页 |
· DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbEGFPTCtag | 第35-36
页 |
· 表达FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞的建立 | 第36
页 |
· ReAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞 | 第36-37
页 |
· DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag | 第37
页 |
· 表达FUkbhalotag 的DC·-FUKY 细胞的建立 | 第37-38
页 |
· HaloTag(?) TMR 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定DC·-FUKY 细胞系 | 第38
页 |
· 实验结果 | 第38-41
页 |
· FUkbEGFPTCtag 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第38-39
页 |
· 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbEGFPTCtag | 第39
页 |
· FUkbhalotag 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第39
页 |
· 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbhalotag | 第39-40
页 |
· ReAsH 标记染色转染FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的DC2.4-FUKY 细胞 | 第40-41
页 |
· 讨论 | 第41-42
页 |
第3章 TCtag 和halotag 在非APC 细胞中特异性标记MHC I 类分子 | 第42-53
页 |
· 实验材料 | 第42-43
页 |
· 主要实验材料 | 第42
页 |
· 主要试剂 | 第42
页 |
· 主要实验设备 | 第42-43
页 |
· 主要试剂的配制 | 第43
页 |
· 实验方法 | 第43-50
页 |
· 表达MHC-I 类分子-FUkbTCtag 融合蛋白载体的构建 | 第43-48
页 |
· Tetracysteine tag(TCtag)寡聚核苷酸序列的设计 | 第43
页 |
· 合成的两条互补的TCtag 寡具核苷酸序列序列退火 | 第43-44
页 |
· Age I 和 BsrG I 酶切质粒载体pKE2 | 第44
页 |
· 酶切载体的回收 | 第44-45
页 |
· 连接:退火后的TC tag 与载体连接 | 第45
页 |
· 连接产物转化 | 第45
页 |
· 阳性克隆的鉴定 | 第45-46
页 |
· Bgl II 和BsrG I 酶切质粒载体pKE2TCtag | 第46
页 |
· 酶切片断kbTCtag 的回收 | 第46
页 |
· BamH I 和BsrG I 酶切质粒载体FUGW | 第46-47
页 |
· 酶切载体FUGW 的回收 | 第47
页 |
· 连接 | 第47
页 |
· 连接产物转化 | 第47
页 |
· 阳性克隆的鉴定 | 第47-48
页 |
· MHC-I 类分子-FUkbTCtag 融合蛋白的表达 | 第48
页 |
· ReAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbTCtag 的293FT 细胞 | 第48-49
页 |
· DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag | 第49-50
页 |
· 稳定表达 FUkbhalotag 的 293FT 细胞的建立 | 第50
页 |
· HaloTag(?) TMR 标记表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定293FT 细胞系 | 第50
页 |
· 实验结果 | 第50-52
页 |
· FUkbTCtag 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第50-51
页 |
· 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbTCtag | 第51
页 |
· ReAsH 标记染色转染FUkbTCtag 的293FT 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的293FT 细胞 | 第51-52
页 |
· 讨论 | 第52-53
页 |
第4章 TCtag 在 APC细胞中非特异性标记 MHC I类分子而halotag在 APC 细胞中特异性标记 MHC I 类分子 | 第53-58
页 |
· 实验材料 | 第53-54
页 |
· 主要实验材料 | 第53
页 |
· 主要实验设备 | 第53
页 |
· 主要试剂的配制 | 第53-54
页 |
· 实验方法 | 第54-57
页 |
· DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbTCtag | 第54-55
页 |
· 表达FUkbTCtag 的DC· 细胞的建立 | 第55
页 |
· FlAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbTCtag 的稳定DC· 细胞系 | 第55
页 |
· DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag | 第55-56
页 |
· 表达FUkbhalotag 的DC· 细胞的建立 | 第56
页 |
· HaloTag(?) TMR 标记表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定DC· 细胞系 | 第56-57
页 |
· 实验结果 | 第57
页 |
· FlAsH 标记染色表达FUkbTCtag 的DC· 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的DC· 细胞 | 第57
页 |
· 讨论 | 第57-58
页 |
第5章 293FT 细胞膜上 MHC I 类分子的表达分布 | 第58-72
页 |
· 实验材料 | 第58-59
页 |
· 主要实验材料 | 第58
页 |
· 主要试剂 | 第58
页 |
· 主要实验设备 | 第58-59
页 |
· 主要试剂的配制 | 第59
页 |
· 实验方法 | 第59-69
页 |
· 表达MHC-I 类分子-FUkbhalotagout 融合蛋白载体的构建 | 第59-68
页 |
· PCR 扩增extracelluar-kb 的引物序列设计 | 第59
页 |
· PCR 扩增合成的extracelluar-kb 寡聚核苷酸 | 第59-60
页 |
· PCR 扩增halotag 的引物序列设计 | 第60
页 |
· PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第60
页 |
· PCR 扩增transmembraneous-cytoplasic-kb(TCkb)的引物序列设计 | 第60-61
页 |
· PCR 扩增合成的TCkb 寡聚核苷酸 | 第61
页 |
· Hind III 和BamHI 酶切PCR 扩增合成的extracelluar-kb 寡聚核苷酸 | 第61-62
页 |
· 酶切载体的回收 | 第62
页 |
· Hind III 和BamHI 酶切pKE2 载体 | 第62
页 |
· 连接pextracelluarkbEGFP | 第62-63
页 |
· 连接产物转化 | 第63
页 |
· 抽提质粒pextracelluarkbEGFP | 第63
页 |
· BsrG I 和EcoR I 酶切PCR 扩增合成的TCkb 寡聚核苷酸 | 第63-64
页 |
· BsrG I 和EcoR I 酶切载体FUGW | 第64
页 |
· 连接FUGWTCkb | 第64
页 |
· 连接产物转化 | 第64-65
页 |
· 抽提质粒FUGWTCkb | 第65
页 |
· BamH I 和BsrG I 酶切PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸 | 第65
页 |
· BamH I 和BsrG I 酶切载体pextracelluarkbEGFP | 第65
页 |
· 连接pextracelluarkbhalotag | 第65-66
页 |
· 连接产物转化 | 第66
页 |
· 抽提质粒pextracelluarkbhalotag | 第66
页 |
· Age I 和BsrG I 酶切载体pextracelluarkbhalotag | 第66-67
页 |
· Age I 和BsrG I 酶切载体FUGWTCkb | 第67
页 |
· 连接FUkbhalotagout | 第67
页 |
· 连接产物转化 | 第67-68
页 |
· 抽提质粒FUkbhalotagout | 第68
页 |
· 阳性克隆的鉴定 | 第68
页 |
· MHC-I 类分子-FUkbhalotagout 融合蛋白的表达 | 第68-69
页 |
· HaloTag(?)Alexa488 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotagout 的293FT 细胞 | 第69
页 |
· 实验结果 | 第69-71
页 |
· FUkbhalotagout 融合蛋白真核表达载体的构建策略 | 第69-70
页 |
· 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbhalotagout | 第70
页 |
· HaloTag(?)Alexa488 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotagout 的293FT 细胞 | 第70-71
页 |
· 讨论 | 第71-72
页 |
第6章 结论与展望 | 第72-74
页 |
· 本研究的技术总结 | 第72-73
页 |
· 本课题的技术创新点 | 第73
页 |
· 本研究的问题与展望 | 第73-74
页 |
致谢 | 第74-75
页 |
参考文献 | 第75-77
页 |
个人简历、在校期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第77页 |