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特异性标记MHC I类分子的新型方法研究

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分类:教育论文网→生物科学论文→分子生物学论文基因工程(遗传工程)论文
特异性标记MHC I类分子的新型方法研究
论文目录
 
中文摘要第1-5 页
Abstract第5-14 页
第1章 引言第14-27 页
  · 研究的背景、目的及意义第14-17 页
    · MHC I 类分子第14 页
    · MHC I 类分子的结构第14-16 页
      · 重链第14-15 页
      · 轻链第15-16 页
    · MHC I 类分子的生物学功能第16-17 页
      · 参与对抗原处理第16 页
      · 约束免疫细胞间相互作用第16 页
      · 参与对免疫应答的遗传控制第16-17 页
      · 诱导自身或同种淋巴细胞反应第17 页
      · 参与T 细胞分化过程第17 页
    · 研究的目的与意义第17 页
  · 国内外标记蛋白方法的研究现状第17-22 页
    · 荧光蛋白标记第17-18 页
    · Tetracysteine tag 标记第18-19 页
    · SNAP tag 标记第19-20 页
    · Halo Tag 标记第20-22 页
  · 研究目标、内容、拟解决的关键问题、实验方法和技术路线第22-27 页
    · 研究目标第22-23 页
    · 研究内容第23 页
    · 拟解决的关键问题第23 页
    · 研究方法及技术路线第23-27 页
第2章 TCtag 和halotag 特异性标记 MHC I 类分子第27-42 页
  · 实验材料第27-28 页
    · 主要实验材料第27 页
    · 主要试剂第27 页
    · 主要实验设备第27-28 页
    · 主要试剂的配制第28 页
  · 实验方法第28-38 页
    · 表达MHC-I 类分子-FUkbEGFPTCtag 融合蛋白载体的构建第28-32 页
      · Bgl II 和 BsrG I 酶切质粒载体pKE2第28-29 页
      · 酶切片断kbEGFP 的回收第29 页
      · BamH I 和 BsrG I 酶切质粒载体FUIEalphaEGFPTCtag第29 页
      · 酶切载体FUTCtag 的回收第29 页
      · 连接第29-30 页
      · 连接产物转化第30 页
      · 挑选克隆、摇菌、提质粒第30-31 页
      · 阳性克隆的鉴定第31 页
      · 质粒电泳第31-32 页
      · 测序鉴定第32 页
    · 表达MHC-I 类分子-FUkbhalotag 融合蛋白载体的构建第32-35 页
      · PCR 扩增halotag 的引物序列设计第32 页
      · PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸第32-33 页
      · Age I 和 BsrG I 酶切PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸第33 页
      · 酶切载体的回收第33-34 页
      · Age I 和 BsrG I 酶切FUKY 载体第34 页
      · 连接第34 页
      · 连接产物转化第34-35 页
      · 阳性克隆的鉴定第35 页
    · DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbEGFPTCtag第35-36 页
    · 表达FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞的建立第36 页
    · ReAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞第36-37 页
    · DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag第37 页
    · 表达FUkbhalotag 的DC·-FUKY 细胞的建立第37-38 页
    · HaloTag(?) TMR 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定DC·-FUKY 细胞系第38 页
  · 实验结果第38-41 页
    · FUkbEGFPTCtag 融合蛋白真核表达载体的构建策略第38-39 页
    · 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbEGFPTCtag第39 页
    · FUkbhalotag 融合蛋白真核表达载体的构建策略第39 页
    · 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbhalotag第39-40 页
    · ReAsH 标记染色转染FUkbEGFPTCtag 的293FT 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的DC2.4-FUKY 细胞第40-41 页
  · 讨论第41-42 页
第3章 TCtag 和halotag 在非APC 细胞中特异性标记MHC I 类分子第42-53 页
  · 实验材料第42-43 页
    · 主要实验材料第42 页
    · 主要试剂第42 页
    · 主要实验设备第42-43 页
    · 主要试剂的配制第43 页
  · 实验方法第43-50 页
    · 表达MHC-I 类分子-FUkbTCtag 融合蛋白载体的构建第43-48 页
      · Tetracysteine tag(TCtag)寡聚核苷酸序列的设计第43 页
      · 合成的两条互补的TCtag 寡具核苷酸序列序列退火第43-44 页
      · Age I 和 BsrG I 酶切质粒载体pKE2第44 页
      · 酶切载体的回收第44-45 页
      · 连接:退火后的TC tag 与载体连接第45 页
      · 连接产物转化第45 页
      · 阳性克隆的鉴定第45-46 页
      · Bgl II 和BsrG I 酶切质粒载体pKE2TCtag第46 页
      · 酶切片断kbTCtag 的回收第46 页
      · BamH I 和BsrG I 酶切质粒载体FUGW第46-47 页
      · 酶切载体FUGW 的回收第47 页
      · 连接第47 页
      · 连接产物转化第47 页
      · 阳性克隆的鉴定第47-48 页
    · MHC-I 类分子-FUkbTCtag 融合蛋白的表达第48 页
    · ReAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbTCtag 的293FT 细胞第48-49 页
    · DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag第49-50 页
    · 稳定表达 FUkbhalotag 的 293FT 细胞的建立第50 页
    · HaloTag(?) TMR 标记表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定293FT 细胞系第50 页
  · 实验结果第50-52 页
    · FUkbTCtag 融合蛋白真核表达载体的构建策略第50-51 页
    · 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbTCtag第51 页
    · ReAsH 标记染色转染FUkbTCtag 的293FT 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的293FT 细胞第51-52 页
  · 讨论第52-53 页
第4章 TCtag 在 APC细胞中非特异性标记 MHC I类分子而halotag在 APC 细胞中特异性标记 MHC I 类分子第53-58 页
  · 实验材料第53-54 页
    · 主要实验材料第53 页
    · 主要实验设备第53 页
    · 主要试剂的配制第53-54 页
  · 实验方法第54-57 页
    · DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbTCtag第54-55 页
    · 表达FUkbTCtag 的DC· 细胞的建立第55 页
    · FlAsH 标记染色表达融合蛋白FUkbTCtag 的稳定DC· 细胞系第55 页
    · DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT 细胞制备慢病毒FUkbhalotag第55-56 页
    · 表达FUkbhalotag 的DC· 细胞的建立第56 页
    · HaloTag(?) TMR 标记表达融合蛋白FUkbhalotag 的稳定DC· 细胞系第56-57 页
  · 实验结果第57 页
    · FlAsH 标记染色表达FUkbTCtag 的DC· 细胞以及HaloTag(?) TMR 标记染色表达FUkbhalotag 的DC· 细胞第57 页
  · 讨论第57-58 页
第5章 293FT 细胞膜上 MHC I 类分子的表达分布第58-72 页
  · 实验材料第58-59 页
    · 主要实验材料第58 页
    · 主要试剂第58 页
    · 主要实验设备第58-59 页
    · 主要试剂的配制第59 页
  · 实验方法第59-69 页
    · 表达MHC-I 类分子-FUkbhalotagout 融合蛋白载体的构建第59-68 页
      · PCR 扩增extracelluar-kb 的引物序列设计第59 页
      · PCR 扩增合成的extracelluar-kb 寡聚核苷酸第59-60 页
      · PCR 扩增halotag 的引物序列设计第60 页
      · PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸第60 页
      · PCR 扩增transmembraneous-cytoplasic-kb(TCkb)的引物序列设计第60-61 页
      · PCR 扩增合成的TCkb 寡聚核苷酸第61 页
      · Hind III 和BamHI 酶切PCR 扩增合成的extracelluar-kb 寡聚核苷酸第61-62 页
      · 酶切载体的回收第62 页
      · Hind III 和BamHI 酶切pKE2 载体第62 页
      · 连接pextracelluarkbEGFP第62-63 页
      · 连接产物转化第63 页
      · 抽提质粒pextracelluarkbEGFP第63 页
      · BsrG I 和EcoR I 酶切PCR 扩增合成的TCkb 寡聚核苷酸第63-64 页
      · BsrG I 和EcoR I 酶切载体FUGW第64 页
      · 连接FUGWTCkb第64 页
      · 连接产物转化第64-65 页
      · 抽提质粒FUGWTCkb第65 页
      · BamH I 和BsrG I 酶切PCR 扩增合成的halotag 寡聚核苷酸第65 页
      · BamH I 和BsrG I 酶切载体pextracelluarkbEGFP第65 页
      · 连接pextracelluarkbhalotag第65-66 页
      · 连接产物转化第66 页
      · 抽提质粒pextracelluarkbhalotag第66 页
      · Age I 和BsrG I 酶切载体pextracelluarkbhalotag第66-67 页
      · Age I 和BsrG I 酶切载体FUGWTCkb第67 页
      · 连接FUkbhalotagout第67 页
      · 连接产物转化第67-68 页
      · 抽提质粒FUkbhalotagout第68 页
      · 阳性克隆的鉴定第68 页
    · MHC-I 类分子-FUkbhalotagout 融合蛋白的表达第68-69 页
    · HaloTag(?)Alexa488 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotagout 的293FT 细胞第69 页
  · 实验结果第69-71 页
    · FUkbhalotagout 融合蛋白真核表达载体的构建策略第69-70 页
    · 鉴定融合蛋白真核表达载体FUkbhalotagout第70 页
    · HaloTag(?)Alexa488 标记染色表达融合蛋白FUkbhalotagout 的293FT 细胞第70-71 页
  · 讨论第71-72 页
第6章 结论与展望第72-74 页
  · 本研究的技术总结第72-73 页
  · 本课题的技术创新点第73 页
  · 本研究的问题与展望第73-74 页
致谢第74-75 页
参考文献第75-77 页
个人简历、在校期间发表的学术论文及取得的研究成果第77页

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