论文目录 | |
| 摘要 | 第1-3
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| Abstract | 第3-4
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| 中文文摘 | 第4-9
页 |
| 绪论 | 第9-21
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| 1 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第9-15
页 |
| 2 BMPs的研究与应用 | 第15-18
页 |
| 3 分子伴侣 | 第18-19
页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第19-21
页 |
| 第一章 实验材料与方法 | 第21-39
页 |
| 第一节 实验材料 | 第21-26
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| · 菌株与质粒 | 第21
页 |
| · 主要试剂 | 第21-22
页 |
| · 主要仪器 | 第22
页 |
| · 常用培养基和缓冲液 | 第22-25
页 |
| · 寡聚核苷酸引物 | 第25-26
页 |
| 第二节 实验方法 | 第26-39
页 |
| · 质粒的提取 | 第26
页 |
| · 限制性内切酶酶切质粒 | 第26
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| · PCR反应 | 第26-27
页 |
| · 连接反应 | 第27
页 |
| · 细菌的转化 | 第27-28
页 |
| · 细菌转化子的鉴定 | 第28
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| · 电转化酵母细胞 | 第28-29
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| · 酵母转化子的鉴定 | 第29
页 |
| · 酵母转化子的小量摇瓶培养 | 第29
页 |
| · 酵母转化子的高密度发酵 | 第29-30
页 |
| · 表达产物的DOT-BLOT分析 | 第30-31
页 |
| · 表达产物N-糖基化酶(Endo H_f)酶切分析 | 第31
页 |
| · 表达产物的WESTERN-BLOT分析 | 第31-32
页 |
| · 表达产物的分离纯化 | 第32-33
页 |
| · SDS-PAGE电泳(考马斯亮蓝法) | 第33
页 |
| · ELISA方法定量分析rhBMP-4 | 第33-34
页 |
| · 经纯化后的rhBMP-4生物活性测定 | 第34-35
页 |
| · hBMP-4全长序列表达载体的构建 | 第35-39
页 |
| 第二章 实验结果 | 第39-55
页 |
| 第一节 hBMP-4成熟肽在毕赤酵母中的表达、纯化及其生物活性的测定 | 第39-50
页 |
| · 酵母转化子高密度发酵和小量摇瓶培养表达量差异 | 第39-40
页 |
| · G8酵母转化子表达产物的纯化 | 第40-44
页 |
| · G8酵母转化子表达产物N-糖基化分析 | 第44-45
页 |
| · G8酵母转化子表达产物N端加工不完全 | 第45-46
页 |
| · 小鼠肌袋包埋法鉴定纯化后的rhBMP-4生物活性 | 第46-47
页 |
| · 碱性磷酸酶活性测定法鉴定纯化后的rhBMP-4生物活性 | 第47-50
页 |
| 第二节 hBMP-4全长在毕赤酵母(GS115)中的表达 | 第50-55
页 |
| · p-hBMP-4/full表达载体的构建(图2-13) | 第50-52
页 |
| · p-hBMP-4/full酵母转化子的筛选 | 第52-53
页 |
| · P-BMP4/full在毕赤酵母中的表达 | 第53-55
页 |
| 第三章 分析与讨论 | 第55-61
页 |
| 第一节 hBMP-4成熟肽在毕赤酵母中的表达、纯化及其生物活性的测定 | 第55-58
页 |
| · hBMP-4成熟肽高密度发酵和小量摇瓶培养条件下的表量差异 | 第55
页 |
| · G8酵母转化子表达产物N-糖基化分析 | 第55-57
页 |
| · G8酵母转化子表达产物N端加工不完全 | 第57-58
页 |
| · G8酵母转化子表达产物rhBMP-4生理活性鉴定 | 第58
页 |
| 第二节 hBMP-4全长在毕赤酵母(GS115)中的表达 | 第58-61
页 |
| 第四章 结论 | 第61-63
页 |
| 附录1 | 第63-64
页 |
| 附录2 | 第64-65
页 |
| 参考文献 | 第65-75
页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第75-77
页 |
| 致谢 | 第77-79
页 |
| 个人简历 | 第79-81页 |
