论文目录 | |
| 致谢 | 第1-4页 |
| 缩略语英汉对照表 | 第4-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 鸡传染性法氏囊病概述 | 第13页 |
| 2 IBDV的历史简介 | 第13-14页 |
| 3 IBDV病原学研究进展 | 第14-18页 |
| · IBDV的生物学特性 | 第14-15页 |
| · 病毒的分类及形态结构 | 第14页 |
| · 病毒的理化性质 | 第14页 |
| · 病毒的增殖特性 | 第14-15页 |
| · 病毒的抗原性 | 第15页 |
| · IBDV的分子生物学特性 | 第15-18页 |
| · 病毒基因组的结构特性 | 第15-16页 |
| · 病毒蛋白结构与作用 | 第16-18页 |
| · IBDV的致病机制及毒力的分子基础 | 第18-20页 |
| · IBDV的致病性研究 | 第18-19页 |
| · IBDV的毒力变异 | 第19页 |
| · VP2和毒力间的关系 | 第19-20页 |
| 5 IBDV的流行病学 | 第20-21页 |
| 6 IBDV的诊断方法与技术 | 第21-22页 |
| · 病毒的分离鉴定 | 第21页 |
| · 血清学诊断方法 | 第21-22页 |
| · 琼脂免疫扩散试验 | 第21页 |
| · 病毒血清中和试验 | 第21页 |
| · 酶联免疫吸附试验 | 第21页 |
| · 其他免疫学诊断方法 | 第21-22页 |
| · 分子生物学诊断技术 | 第22页 |
| 7 IBDV的细胞培养技术 | 第22-24页 |
| · 动物细胞培养的起源 | 第22页 |
| · 动物细胞培养的方法 | 第22-23页 |
| · 贴壁培养 | 第22-23页 |
| · 悬浮培养 | 第23页 |
| · IBDV适应增殖的细胞 | 第23-24页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 试验一 鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定 | 第25-32页 |
| 1 材料与方法 | 第25-28页 |
| · 材料 | 第25页 |
| · 主要仪器 | 第25页 |
| · SPF鸡胚及SPF鸡 | 第25页 |
| · IBDV抗原和标准阳性血清 | 第25页 |
| · 方法 | 第25-28页 |
| · 病料来源 | 第25页 |
| · 病料处理 | 第25页 |
| · 琼脂免疫扩散试验(AGID) | 第25-26页 |
| ·回归易感鸡试验 | 第26页 |
| · 病毒在SPF鸡胚上的分离培养 | 第26页 |
| · 分离株毒力测定 | 第26页 |
| · 引物合成 | 第26页 |
| · RT-PCR扩增鉴定 | 第26-28页 |
| 2 结果 | 第28-31页 |
| · 琼脂免疫扩散试验(AGID) | 第28页 |
| · 动物回归试验 | 第28页 |
| · 病毒在SPF鸡胚上传代结果 | 第28-29页 |
| · IBDV分离株毒力测定 | 第29-30页 |
| · SPF鸡只发病情况及剖检变化 | 第29页 |
| · SPF鸡只发病率及死亡率 | 第29页 |
| · SPF鸡胚病变 | 第29-30页 |
| · 分离株ELD_(50)的测定 | 第30页 |
| · PCR检测结果 | 第30-31页 |
| 3 结论 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 试验二 分离株细胞驯化培养及特性研究 | 第32-40页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| · 材料 | 第32-33页 |
| · 主要仪器设备 | 第32页 |
| · 耗材 | 第32页 |
| · 主要试剂及配制 | 第32-33页 |
| · 细胞与毒株 | 第33页 |
| · 方法 | 第33-35页 |
| · DF-I细胞培养 | 第33-34页 |
| · IBDVHN12株在DF-1细胞上培养条件优化 | 第34页 |
| · IBDV细胞适应毒株毒力测定 | 第34页 |
| · 细胞适应毒株的理化特性 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-38页 |
| · IBDV在DF-1细胞上培养条件优化 | 第35-36页 |
| · 细胞生长曲线 | 第35-36页 |
| · IBDV最佳接毒量的确定 | 第36页 |
| · IBDV接种细胞吸附时间的确定结果 | 第36页 |
| · 血清浓度对IBDV增殖的影响 | 第36页 |
| · 细胞适应毒株AGID检测 | 第36-37页 |
| · 细胞适应毒株毒力 | 第37-38页 |
| · DF-1细胞病变 | 第37页 |
| · TCIDso测定 | 第37-38页 |
| · IBDV细胞适应毒株的理化试验结果 | 第38页 |
| · 病毒的凝集试验结果 | 第38页 |
| · 有机溶剂试验和耐酸碱性试验 | 第38页 |
| · 耐热性试验结果表明 | 第38页 |
| 3 结论 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 试验三 分离株原毒、鸡胚毒和细胞毒VP2的克隆及序列分析 | 第40-55页 |
| l材料与方法 | 第40-48页 |
| · 材料 | 第40-42页 |
| · 主要仪器设备 | 第40页 |
| · 毒株 | 第40页 |
| · 菌株及载体 | 第40页 |
| · 主要生物学试剂 | 第40-41页 |
| · 试剂配制 | 第41-42页 |
| · 方法 | 第42-48页 |
| · 病料的处理 | 第42页 |
| · 引物设计及合成 | 第42-43页 |
| · 病毒RNA的提取 | 第43页 |
| · 反转录PCR(RT-PCR)扩增 | 第43-44页 |
| · 1%琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| · PCR产物的回收与纯化 | 第44-45页 |
| · 重组克隆质粒的构建 | 第45-46页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第46页 |
| · 3株不同IBDV适应毒株核苷酸序列测定及序列分析 | 第46-47页 |
| · 各适应毒株系统进化树分析 | 第47页 |
| · 各适应毒株2级结构比较分析 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-52页 |
| · IBDV不同适应毒株VP2的RT-PCR扩增结果 | 第48页 |
| · IBDV不同适应毒株VP2基因片段PCR产物纯化结果 | 第48页 |
| · 重组质粒的酶切鉴定及测序鉴定 | 第48-49页 |
| · IBDVVP2基因片段的测序及序列分析 | 第49-52页 |
| · 3株IBDVVP2间基因片段及推导的氨基酸比较分析 | 第49页 |
| · 各适应毒株同源性比较分析 | 第49-50页 |
| · 系统进化树分析 | 第50-51页 |
| · 3株IBDV适应毒株VP2基因2级结构比较分析 | 第51-52页 |
| 3 结论 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 试验四 分离株囊毒、胚毒和细胞毒对SPF鸡免疫效果实验 | 第55-60页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| · 材料 | 第55页 |
| · 毒株 | 第55页 |
| · 种蛋及SPF鸡 | 第55页 |
| · 主要仪器设备 | 第55页 |
| · 方法 | 第55-57页 |
| · 病毒准备 | 第55-56页 |
| · 病毒毒力测定 | 第56页 |
| · 不同毒株灭活免疫乳化剂的制备 | 第56页 |
| · 安全性检验 | 第56-57页 |
| · 效力检验 | 第57页 |
| · 血清AGID滴度检测 | 第57页 |
| · 血清中和试验 | 第57页 |
| · 免疫保护试验 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-58页 |
| · 病毒毒力测定 | 第57页 |
| · HN12B1毒株ELD_(50)测定 | 第57页 |
| · HN12E4毒株ELD_(50)测定 | 第57页 |
| · HN12C8毒株TCID_(50)测定 | 第57页 |
| · 安全试验 | 第57-58页 |
| · 血清AGID滴度测定 | 第58页 |
| · 中和试验结果 | 第58页 |
| · 免疫保护试验 | 第58页 |
| 3 结论与讨论 | 第58-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录一：VP2推导氨基酸序列对比 | 第65-67页 |
| 英文摘要 | 第67-68页 |
