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PEDV/TGEV/PDCoV快速检测方法的建立及PEDV COE基因和ORF3基因遗传变异研究

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PEDV/TGEV/PDCoV快速检测方法的建立及PEDV COE基因和ORF3基因遗传变异研究
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-13页
第一章 前言第13-22页
  · 流行病学第13-14页
  · 猪流行性腹泻病毒感染研究概况第14-18页
    · 猪流行性腹泻及其分子生物学特性第14-18页
  · 猪流行性腹泻病毒检测方法研究进展第18-20页
    · 免疫电镜法第18页
    · 免疫荧光法第18-19页
    · 微量血清中和试验第19页
    · ELISA方法第19页
    · RT-LAMP技术第19页
    · RT-PCR检测法第19-20页
  · 本研究的目的和意义第20-22页
第二章 PEDV、TGEV、PDCOV三重RT-PCR检测方法的建立第22-36页
  1 材料与方法第22-28页
    · 病毒和毒株第22页
    · 主要试剂第22页
    · 主要仪器第22-23页
    · 常用试剂和培养基配制第23页
    · 引物的设计与合成第23-24页
    · 样品及模板的制备第24-25页
      · PEDV RNA的抽提第24页
      · 反转录体系第24-25页
    · 常规RT-PCR扩增第25-26页
      · 常规PCR反应体系的初步建立第25-26页
    · 多重PCR检测方法的建立及条件优化第26-28页
      · 多重PCR条件的优化第26-27页
      · 特异性试验第27页
      · 敏感性试验第27页
      · 多重RT-PCR临床检测及与常规RT-PCR的比较第27-28页
  2 结果第28-33页
    · 单重PCR条件的确定第28页
    · 多重PCR条件的摸索第28-29页
      · 退火温度第28-29页
      · 引物浓度第29页
    · 多重RT-PCR特异性检测结果第29-31页
    · 多重RT-PCR敏感性检测结果第31-32页
    · 多重RT-PCR临床检测和单重RT-PCR的比较结果第32-33页
  3 小结与讨论第33-36页
第三章 猪流性腹泻病毒套式RT-PCR检测方法的建立第36-45页
  1 材料与方法第36-39页
    · 毒株及细胞第36页
    · 主要试剂第36页
    · 主要仪器第36-37页
    · 常用试剂和培养基配制第37页
    · 引物的设计与合成第37页
    · RNA的抽提与CDNA的合成第37-38页
      · RNA抽提第37-38页
      · CDNA的合成第38页
    · 操作方法第38-39页
      · 第一轮反应第38-39页
      · 第二轮反应第39页
    · 特异性试验第39页
    · 灵敏性试验第39页
    · RT-NESTED PCR的初步应用第39页
  2 结果第39-43页
    · 套式RT-PCR的结果第39-40页
    · 特异性检验第40-42页
    · 灵敏性试验第42页
    · RT-NESTED PCR的初步应用结果第42-43页
  3 讨论与小结第43-45页
第四章 猪流行性腹泻病毒ORF3和COE全基因序列测定及分析第45-60页
  1 材料与方法第45-52页
    · 病毒第45页
    · 主要试剂第45页
    · 主要仪器第45页
    · 常用试剂和培养基配制第45页
    · 引物的设计与合成第45页
    · 参考毒株第45-46页
    · 病料的鉴定第46-52页
      · PEDV RNA的抽提第46-47页
      · CDNA的合成第47页
      · ORF3和COE基因的扩增第47-49页
      · 目的片段产物的纯化回收第49页
      · 回收纯化的DNA产物连接PMD18-T载体第49-50页
      · 大肠杆菌DH5Α感受态细胞的制备第50页
      · 连接产物转化DH5Α 感受态细胞第50页
      · 重组质粒的鉴定第50-51页
      · ORF3和COE基因序列测定、分析和比较第51-52页
  2 结果第52-58页
    · PEDV ORF3和COE全基因RT-PCR扩增结果第52页
    · 菌液PCR检测和序列分析结果第52-58页
  3 讨论与小结第58-60页
全文总结第60-61页
致谢第61-62页
参考文献第62-67页

本篇论文共67页,点击这进入下载页面
 
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