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香蕉枯萎病菌2小种间Mads1和Flo1的比较与致病功能研究

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香蕉枯萎病菌2小种间Mads1和Flo1的比较与致病功能研究
论文目录
 
摘要第1-5页
abstract第5-8页
缩略词及中英文对照第8-15页
1 前言第15-28页
  · 香蕉枯萎病概况第15-18页
    · 香蕉枯萎病的发生与危害情况第15-16页
    · 香蕉枯萎病菌的生理小种第16页
    · 香蕉枯萎病的防治第16-18页
      · 化学防治第16-17页
      · 生物防治第17-18页
      · 抗病育种第18页
  · 尖孢镰刀菌致病相关基因研究第18-22页
    · G蛋白第19-20页
    · 转录因子第20-21页
    · 效应子第21页
    · 几丁质合成酶第21-22页
  · MADS-Box转录因子研究慨况第22-24页
    · MADS-Box功能介绍第22-23页
    · MADS-Box在真菌中的研究现状第23-24页
  · PA14基因家族第24-27页
  · 研究目的和意义第27-28页
2 材料与方法第28-59页
  · 主要仪器和设备第28页
  · 主要试剂第28-29页
  · 供试菌株第29页
  · 供试植物第29页
  · 宿主菌第29页
  · 质粒载体第29-30页
  · 主要培养基和溶液的配制第30-32页
  · 试验方法第32-59页
    · 致病相关基因的实时荧光定量检测及筛选第32-35页
      · Foc1和Foc4经香蕉根部处理第32页
      · Foc及香蕉根部总RNA提取第32-33页
      · c DNA第一链的合成第33-34页
      · Real-time PCR引物设计第34页
      · Real-time PCR反应第34-35页
    · 香蕉枯萎病菌Mads1,Flo1基因的克隆第35-44页
      · 香蕉枯萎病菌基因组DNA的提取第35-36页
      · 香蕉枯萎病菌RNA提取第36-37页
      · 引物设计第37-38页
      · 香蕉枯萎病菌Mads1、Flo1基因DNA的扩增第38-39页
      · 香蕉枯萎病菌Mads1、Flo1基因c DNA的扩增第39-40页
      · PCR产物的回收第40-41页
      · 宿主菌E.coli DH5α 感受态细胞的制备第41页
      · 回收产物的连接转化、蓝白斑筛选转化子第41-42页
      · 单菌落PCR筛选阳性克隆第42页
      · 阳性克隆质粒的抽提及测序第42-43页
      · 序列分析与对比第43-44页
    · Mads1、Flo1侧翼片段hi TAIL-PCR扩增第44-47页
      · Mads1、Flo1侧翼片段hi TAIL-PCR扩增引物设计及反应体系第44-46页
      · PCR产物的回收第46页
      · 回收产物的连接转化与转化第46页
      · 阳性克隆的筛选与鉴定第46页
      · 阳性克隆质粒的抽提及测序第46-47页
    · 香蕉枯萎病菌Mads1、Flo1致病功能验证第47-59页
      · 基因敲除引物的设计第47页
      · 敲除载体构建策略第47-48页
      · Mads1、Flo1上游基因敲除片段的构建第48-49页
      · Mads1、Flo1下游基因敲除片段的构建第49页
      · Mads1、Flo1上游同源臂与载体p BHt2相连第49-50页
      · Mads1、Flo1下游同源臂与载体p BHt2相连第50-52页
      · 根癌农杆菌感受态细胞的制备第52页
      · 敲除载体质粒电击转化根癌农杆菌第52-53页
      · ATMT介导转化第53页
      · Mads1、Flo1基因敲除突变体的筛选鉴定第53-54页
      · Southern杂交鉴定第54-57页
      · 敲除突变体菌落形态观察和生长速率测定第57页
      · 突变体的产孢量比较第57页
      · Mads1、Flo1基因敲除突变体的致病性测定第57-59页
3 结果与分析第59-99页
  · 致病相关基因的表达量分析第59-65页
    · 香蕉枯萎病菌及香蕉根部总RNA提取第59页
    · 致病相关基因在Foc处理香蕉根部后的表达量变化第59-65页
    · 实时荧光定量结果小结第65页
  · 香蕉枯萎病菌总DNA和总RNA的提取第65-66页
    · 香蕉枯萎病菌1号和4号小种总DNA的提取第65-66页
    · 香蕉枯萎病菌1号和4号小种RNA的提取第66页
  · 香蕉枯萎病菌Mads1、Flo1基因的克隆和序列分析第66-76页
    · Mads1、Flo1基因DNA的扩增与克隆第66-67页
    · Mads1、Flo1基因c DNA的扩增与克隆第67-68页
    · Mads1、Flo1基因c DNA与DNA的序列分析第68页
    · Mads1、Flo1基因2小种的核苷酸及氨基酸的比较第68-71页
    · Mads1、Flo1蛋白功能域预测分析第71-72页
    · Mads1、Flo1编码蛋白二级结构预测分析第72-74页
    · Mads1、Flo1编码蛋白三级结构预测分析第74页
    · Mads1、Flo1氨基酸序列遗传发育树构建第74-76页
  · Mads1、Flo1基因侧翼序列的扩增和克隆第76-78页
    · hi TAIL-PCR扩增Mads1、Flo1上游序列第76-77页
    · hi TAIL-PCR扩增Mads1、Flo1下游序列第77-78页
  · 香蕉枯萎病菌Mads1、Flo1基因的敲除第78-99页
    · Mads1、Flo1基因上下游同源臂扩增第78-80页
    · Mads1、Flo1基因的敲除载体构建第80-86页
      · Mads1、Flo1基因上游同源臂与敲除载体p BHt2连接第80-83页
      · Mads1、Flo1基因下游同源臂与p BHt2-Mads1-up、p BHt2-Flo1-up连接第83-86页
    · 重组敲除质粒转化根癌农杆菌AGL1的结果第86-88页
      · 重组敲除质粒p BHT2-△Mads1转化根癌农杆菌AGL1的结果第86-87页
      · 重组敲除质粒p BHT2-△Flo1转化根癌农杆菌AGL1的结果第87-88页
    · Mads1、Flo1基因敲除突变体的PCR检测第88-91页
      · Mads1基因敲除突变体的PCR检测第88-90页
      · Flo1基因敲除突变体的PCR检测第90-91页
    · Mads1、Flo1敲除突变体的Southern Blot检测第91-92页
    · Mads1、Flo1基因敲除突变体的生物学特性第92-96页
      · Mads1、Flo1基因敲除突变体的表型第92-93页
      · Mads1、Flo1基因敲除突变体产孢量比较第93-95页
      · Mads1、Flo1基因敲除突变体生长速率比较第95-96页
    · Mads1、Flo1基因敲除突变体的致病性测定第96-99页
4 结论与讨论第99-105页
  · 致病相关基因实时荧光定量验证第99页
  · Mads1、Flo1基因克隆和序列分析第99-102页
  · Mads1、Flo1基因的致病功能验证第102-104页
  · 展望第104-105页
致谢第105-106页
参考文献第106-117页
附录第117-119页

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