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凡纳滨对虾与WSSV侵染相关的细胞与基因功能分析

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凡纳滨对虾与WSSV侵染相关的细胞与基因功能分析
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-13页
前言第13-23页
  · 对虾白斑综合征病毒(WSSV)研究概况第14-19页
    · WSSV 生物学特征和宿主范围第14-15页
    · WSSV 感染过程和方式第15页
    · WSSV 的囊膜蛋白和功能研究第15-18页
    · WSSV 囊膜蛋白与宿主细胞受体的相互作用第18-19页
  · Runt 转录因子的研究情况第19页
  · 荧光微球应用的相关研究第19-21页
    · 在检测方面的应用第20页
    · 在标记和示踪方面的作用第20-21页
  · 展望第21-23页
第一章 运用荧光显微镜观察凡纳滨对虾细胞对FITC标记的WSSV 几种囊膜蛋白的内吞现象第23-30页
  ·实验材料和仪器第23-24页
    · 材料第23页
    · 试剂第23-24页
    · 仪器第24页
  ·实验方法第24-26页
    · 几种重组囊膜蛋白的制备第24页
    · 重组囊膜蛋白的 FITC 标记第24页
    · 凡纳滨对虾血淋巴细胞的原代培养第24-25页
    · 凡纳滨对虾甲壳下表皮细胞、造血细胞和淋巴细胞的原代培养第25页
    · 对虾细胞对 FITC 标记的重组囊膜蛋白的内吞作用实验第25-26页
  ·结果第26-29页
    · 几种重组 WSSV 囊膜蛋白的制备第26页
    · 凡纳滨对虾血细胞对几种 FITC 标记的囊膜蛋白的内吞作用第26-27页
    · 凡纳滨对虾不同宿主细胞对 WSSV 囊膜蛋白的内吞作用第27-29页
  ·讨论第29-30页
第二章 应用流式荧光微球法研究 WSSV 囊膜蛋白与凡纳滨对虾血细胞的相互作用第30-43页
  第一节 应用流式荧光微球法研究凡纳滨对虾血细胞对几种 WSSV 囊膜蛋白的内吞作用第31-37页
    ·材料和仪器第31页
      · 材料第31页
      · 仪器第31页
    ·方法第31-33页
      · 荧光微球与囊膜蛋白的偶联(以 VP37 为例)第31-32页
      · 紫外检测囊膜蛋白与荧光微球偶联效率第32页
      · 间接免疫荧光法检测偶联效果第32-33页
      · 流式细胞术双荧光法检测对虾血细胞对囊膜蛋白的内吞作用第33页
    ·结果第33-36页
      · 紫外检测蛋白偶联效率结果(表 2-1)第33-34页
      · 间接免疫荧光法验证蛋白 rVP37 的偶联情况第34-35页
      · 流式检测 WSSV 囊膜蛋白 VP26、VP28 和 VP37 与对虾血细胞的作用第35-36页
    ·讨论第36-37页
  第二节 BP53、Rab7 和 AK 分别对 rVP37、rVP28 和 rVP31 的细胞内吞抑制实验第37-43页
    ·材料和仪器第37页
      · 材料第37页
      · 仪器第37页
    ·方法第37-38页
    ·结果第38-41页
    ·讨论第41-43页
第三章 凡纳滨对虾 Runt 转录因子的基因克隆及序列分析31第43-55页
  1.材料第43-44页
    · 凡纳滨对虾和 WSSV 病料第43页
    · 试验试剂和仪器第43-44页
  2.实验方法第44-48页
    · 凡纳滨对虾血细胞总 RNA 的提取第44页
    · cDNA 第一链的合成第44-45页
    · 同源克隆 lvrunt cDNA 片段第45-46页
    · 5'-RACE 和 3'-RACE 获得 cDNA 全长序列第46-48页
    · 凡纳滨对虾 Runt 基因的 cDNA 序列分析及其编码的多肽序列分析第48页
  3.结果第48-53页
    · 同源克隆获得 lvrunt 基因的保守区域片段第48-49页
    · lvrunt 基因的 5’RACE 和 3’RACE 结果第49-50页
    · lvrunt 全长序列特征第50-51页
    · 凡纳滨对虾转录因子(LvRunt)蛋白结构特征分析第51-52页
    · 不同种类 Runt 保守性分析第52-53页
  4.讨论第53-55页
第四章 凡纳滨对虾 Runt 基因的组织表达分布以及注射造血激素、WSSV 病毒后转录水平变化第55-63页
  ·实验材料和仪器第55-56页
    · 试剂和材料第55页
    · 实验仪器第55-56页
  ·实验方法第56-58页
    · WSSV 病毒粗提液的制备第56页
    · 凡纳滨对虾造血激素 LvAST 纯化蛋白的制备第56-57页
    · lvrunt 基因的组织表达分析第57页
    · 凡纳滨对虾的攻毒实验第57页
    · 凡纳滨对虾的注射 LvAST 实验第57页
    · lvrunt 转录量的测定(含有 RNA 提取和荧光定量 PCR)第57-58页
  ·结果第58-62页
    · lvrunt 和 18S rRNA 荧光定量引物特异性检测第58-59页
    · lvrunt 基因在凡纳滨对虾体内的不同组织表达差异第59-60页
    · 注射对虾造血激素(Astakine)后 lvrunt 基因转录水平变化第60-61页
    · 注射 WSSV 后 lvrunt 基因的表达变化第61-62页
  ·讨论第62-63页
第五章 凡纳滨对虾 Runt 的原核表达及其对凡纳滨对虾感染WSSV 的保护作用研究第63-72页
  ·实验材料第63-64页
    · 质粒和菌种第63页
    · 实验试剂和仪器第63页
    · 实验试剂的配置第63-64页
  ·实验方法第64-67页
    · 重组质粒的构建第64-66页
    · LvRunt 的诱导表达和表达产物的 SDS-PAGE 分析第66页
    · 原核表达的凡纳滨对虾 Runt 蛋白纯化以及 Western-blot 分析第66页
    · LvRunt 蛋白的免疫保护实验第66-67页
  ·结果第67-71页
    · 质粒 pBAD/ gIIIA 与 lvrunt 目的片段的制备第67-68页
    · 重组质粒(pBAD/ gIIIA-lvrunt)的构建第68-69页
    · lvrunt 表达产物分析及蛋白的纯化第69-70页
    · LvRunt 对凡纳滨对虾感染 WSSV 的相对保护作用结果第70-71页
  ·讨论第71-72页
参考文献第72-77页
致谢第77-78页
个人简历第78页
个人学术成果第78-79 页

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