论文目录 | |
| 第一部分 HBD1稳定表达细胞株的建立及其表达产物对多重耐药菌的活性检测 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第二部分 新型非病毒载体0-CHCS携带hBD2转染L929细胞及表达产物活性检测 | 第11-13页 |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一部分 hBD1稳定表达细胞株的建立及其表达产物对多重耐药菌的活性检测 | 第13-35页 |
| 第一章 前言 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料 | 第14-19页 |
| · 菌株、质粒、细胞株 | 第14页 |
| · 实验试剂 | 第14-15页 |
| · 主要试剂以及配置 | 第15-19页 |
| 第三章 实验方法 | 第19-24页 |
| · 细胞培养 | 第19-20页 |
| · 细胞培养前的准备工作 | 第19页 |
| · 细胞复苏 | 第19页 |
| · 细胞传代 | 第19-20页 |
| · 冻存细胞 | 第20页 |
| · 引物设计 | 第20页 |
| · 获得hBD1稳定表达细胞株 | 第20-22页 |
| · 确定G418药物筛选浓度 | 第20页 |
| · 细胞转染 | 第20页 |
| · G418压力筛选获得单克隆细胞株 | 第20-21页 |
| · 提取各单克隆细胞株细胞总RNA | 第21页 |
| · RT-PCR扩增反应 | 第21-22页 |
| · Western blotting检测hBD1蛋白水平的表达 | 第22-23页 |
| · 灌注蛋白电泳凝胶 | 第22-23页 |
| · Tris-Tricine电泳 | 第23页 |
| · 转印蛋白质 | 第23页 |
| · 免疫标记 | 第23页 |
| · 检测hBD1对多种耐药菌的抗菌活性 | 第23-24页 |
| 第四章 实验结果 | 第24-31页 |
| · hBD1稳定表达细胞株目的基因的表达 | 第24页 |
| · hBD1稳定表达细胞株细胞培养上清中HBD1蛋白的检测 | 第24-25页 |
| · hBD1对多种多重耐药菌株的抗菌活性 | 第25-31页 |
| · hBD1对多重耐药鲍氏不动杆菌的抗菌活性 | 第25页 |
| · hBD1对多重耐药大肠埃希菌的抗菌活性 | 第25页 |
| · hBD1对多重耐药肺炎克雷伯杆菌的抗菌活性 | 第25-30页 |
| · hBD1对多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的抗菌活性 | 第30-31页 |
| 第五章 讨论 | 第31-33页 |
| 第六章 参考文献 | 第33-35页 |
| 第二部分 新型非病毒载体O-CHCS携带HBD2转染L929细胞及表达产物活性检测 | 第35-50页 |
| 第一章 前言 | 第35-36页 |
| 第二章 实验材料 | 第36-40页 |
| · 菌株、质粒、细胞株 | 第36页 |
| · 实验试剂 | 第36-37页 |
| · 主要试剂以及配置 | 第37-40页 |
| 第三章 实验方法 | 第40-44页 |
| · 引物设计 | 第40页 |
| · 真核表达载体pCMV-hBD2的构建 | 第40-41页 |
| · 制备O-CHCS纳米颗粒混液 | 第41页 |
| · 透析袋的处理 | 第41页 |
| · O-CHCS的处理 | 第41页 |
| · 细胞培养及转染 | 第41-42页 |
| · 提取细胞总RNA及进行RT-PCR | 第42页 |
| · 器械的处理 | 第42页 |
| · 细胞总RNA的提取 | 第42页 |
| · RT-PCR扩增反应 | 第42-43页 |
| · RT-PCR扩增反应的体系 | 第42-43页 |
| · RT-PCR产物在·%的琼脂糖凝胶上进行电泳 | 第43页 |
| · Western blotting检测转染后细胞培养上清中hBD2蛋白 | 第43-44页 |
| · 灌注蛋白电泳凝胶 | 第43页 |
| · SDS-PAGE凝胶电泳 | 第43-44页 |
| · 转印蛋白质 | 第44页 |
| · 免疫标记 | 第44页 |
| · Kirby-Bauer纸片扩散法检测抗菌活性 | 第44页 |
| 第四章 实验结果 | 第44-46页 |
| · 真核表达载体pCMV-hBD2的鉴定 | 第44-45页 |
| · 转染细胞hBD2基因表达检测 | 第45页 |
| · 转染后检测细胞培养上清中hBD2蛋白 | 第45-46页 |
| · 抗菌活性检测 | 第46页 |
| 第五章 讨论 | 第46-48页 |
| 第六章 参考文献 | 第48-50页 |
| 英文缩写表 | 第50-51页 |
| 主要的实验仪器 | 第51-53页 |
| 硕士期间发表的论文或成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
