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抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体原核表达质粒的构建及其间接ELISA筛选方法的建立

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抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体原核表达质粒的构建及其间接ELISA筛选方法的建立
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-11页
目录第11-16页
图片目录第16-17页
表格目录第17-18页
符号说明第18-21页
第一章 文献综述第21-42页
  1. 鸡传染性支气管炎概述第21-28页
    · 发现简史第21-22页
    · 病原学第22-24页
      · 分类和形态第22-23页
      · 化学结构第23-24页
      · 抗原性第24页
    · 流行病学第24-26页
      · 我国IBV 发生的流行病学新特点第24-25页
        · 肉鸡对鸡传粢性支气管炎越来越敏感第24-25页
        · 免疫鸡群不断暴发鸡传染性支气管炎第25页
      · IBV 频发的主要原因第25页
      · 发病机制第25-26页
    · 诊断第26-27页
      · 血清学诊断第26页
      · 分子生物学诊断第26-27页
    · 防治第27-28页
  2. 基因工程单链抗体概述第28-40页
    · 单链抗体的结构第29-30页
    · 单链抗体基因的扩增第30-31页
    · 单链抗体的表达第31-34页
      · 表达载体第31-32页
        · 质粒载体第31-32页
        · 噬菌体载体第32页
        · 腺病毒载体第32页
      · 表达系统第32-34页
        · 细菌第32-33页
        · 酵母和丝状真菌第33页
        · 植物第33-34页
        · 杆状病毒第34页
    · 基因工程单链抗体在动物疾病研究中的应用第34-37页
      · 在病毒性疾病研究中的应用第34-36页
        · 可检测特异病毒并区分不同毒株第34页
        · 可用于DIVA 检测第34-35页
        · 可抑制病毒复制第35-36页
      · 检测特定病原菌感染第36-37页
      · 用于寄生虫病的防治第37页
    · scFv 的前景展望第37-40页
      · 提供可控制的“基因敲除”第38页
      · 应用第38-40页
  3. 研究目的和意义第40-42页
第二章 抗IBV 单链抗体原核表达质粒的构建第42-72页
  1. 材料第42-46页
    · 实验动物、毒株与菌种第42-43页
    · 主要试剂第43页
    · 主要仪器第43-44页
    · 主要溶液的配制第44-46页
  2. 实验方法第46-59页
    · 鸡的免疫及阴性、阳性血清制备第47页
      · 阴性血清的制备第47页
      · 鸡的免疫及阳性血清的制备第47页
    · 脾脏总RNA 提取第47-48页
      · 液氮研磨病料第47页
      · Trizol 法提取总RNA第47-48页
    · 引物设计第48页
    · 目的基因的扩增第48-52页
      · RT-PCR 扩增cDNA 第一链第49页
      · VH、VL 基因的扩增第49-50页
      · 琼脂糖凝胶电泳第50页
      · PCR 产物的回收纯化第50-51页
      · VH-Linker、VL-Linker 的扩增第51-52页
    · scFv 原核表达质粒的构建与鉴定第52-56页
      · scFv 的扩增第52-53页
      · 质粒提取第53-54页
      · PCR 产物scFv 与质粒pOPE101-XP 连接反应第54-55页
      · 双酶切鉴定第55页
      · 转化感受态细胞JM109(DE3)第55页
      · 菌落PCR 鉴定第55-56页
    · 可溶性scFv 的诱导表达第56页
    · 周质腔中scFv 提取第56页
    · 测序第56-57页
    · SDS-PAGE 鉴定重组蛋白的表达第57页
    · 可溶性scFv 的纯化第57-58页
    · 紫外分光光度法测周质腔中scFv 浓度第58-59页
  3. 结果第59-69页
    · 目的基因扩增结果第59-60页
      · VH、VL 基因的扩增第59-60页
      · scFv 基因的扩增第60页
    · 质粒提取第60-61页
    · 重组质粒的双酶切鉴定第61-62页
    · 重组质粒转化感受态细胞JM109(DE3)第62页
    · 菌落PCR 鉴定第62-63页
    · 测序结果及Blast 序列分析第63-67页
    · 重组质粒的诱导表达结果第67-68页
    · 紫外分光光度法测样品中scFv 浓度第68-69页
  4. 讨论第69-72页
第三章 间接ELISA 筛选方法的建立及试验条件优化第72-96页
  第一节 抗原的制备及纯化鉴定第74-85页
    1. 材料第74-76页
      · 实验动物、毒株与抗体第74页
      · 主要试剂、溶液配制第74-75页
      · 主要仪器、器材第75-76页
    2. 实验方法第76-81页
      · IBV M41 抗原的制备第76-77页
        · 接种前的准备第76页
        · IBV M41 接种SPF 鸡胚第76-77页
        · 收获鸡胚尿囊液第77页
      · 病毒液的浓缩第77-78页
        · 尿囊液前处理第77页
        · 透析袋前处理第77-78页
        · 病毒液浓缩第78页
      · 病毒液的纯化第78-79页
        · 超速离心法第78页
        · 蔗糖密度梯度离心法第78-79页
        · 去蔗糖超速离心第79页
      · Western blotting 检测IBV 与scFv 反应性第79-81页
      · 紫外分光光度法测病毒浓度第81页
    3. 结果第81-83页
      · 蔗糖密度梯度离心纯化病毒第81页
      · Western blotting 鉴定结果第81页
      · 紫外分光光度法测病毒浓度第81-83页
    4. 讨论第83-85页
  第二节 间接ELISA 筛选方法的建立第85-96页
    1. 材料第85-86页
      · 病毒、抗体第85页
      · 主要试剂、溶液配制第85-86页
      · 主要仪器、器材第86页
    2. 实验方法第86-89页
      · 间接ELISA 操作程序第86-87页
      · 间接ELISA 方法反应条件初探第87页
      · 间接ELISA 方法最佳反应条件的确定第87-88页
        · 阳性血清确定抗原最佳包被浓度第87-88页
        · 单链抗体样品最佳稀释倍数的确定第88页
        · 封闭条件的确定第88页
      · 敏感性实验第88页
      · 交叉性实验第88-89页
      · 重复性实验第89页
    3. 结果第89-94页
      · 间接ELISA 初测样品中scFv 的效价第89页
      · 阳性血清确定抗原最佳包被浓度第89-90页
      · 可溶性scFv 最佳反应浓度第90-91页
      · 封闭条件的确定第91-92页
      · 敏感性实验第92-93页
      · 交叉性实验第93页
      · 重复性实验第93-94页
    4. 讨论第94-96页
第四章 全文总结第96-98页
参考文献第98-110页
攻读硕士期间发表的论文第110-111页
致谢第111-112 页

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