论文目录 | |
| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-15页 |
| 1 猪流行性腹泻病毒诊断方法的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1 概述 | 第10页 |
| 1.2 分子生物学诊断方法 | 第10-11页 |
| 2 猪Dleta冠状病毒及其诊断方法研究进展 | 第11-15页 |
| 2.1 概述 | 第11-12页 |
| 2.2 流行情况分析 | 第12页 |
| 2.3 PDCoV全基因分析及其结构蛋白的功能特征 | 第12-13页 |
| 2.4 诊断方法 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 试验一 猪Delta冠状病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第16-26页 |
| 1 材料与方法 | 第16-21页 |
| 1.1 材料 | 第16页 |
| 1.2 方法 | 第16-21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-25页 |
| 2.1 PDCoV常规PCR扩增 | 第21页 |
| 2.2 质粒浓度的计算 | 第21页 |
| 2.3 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR反应条件的优化结果 | 第21-22页 |
| 2.4 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第22页 |
| 2.5 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR的溶解曲线分析 | 第22-23页 |
| 2.6 PDCoV特异性试验结果 | 第23页 |
| 2.7 PDCoV重复性试验结果 | 第23-24页 |
| 2.8 PDCoV敏感性试验结果 | 第24页 |
| 2.9 临床样品检测结果 | 第24-25页 |
| 3 结论与讨论 | 第25-26页 |
| 试验二 猪流行性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第26-32页 |
| 1 材料与方法 | 第26-28页 |
| 1.1 材料 | 第26页 |
| 1.2 方法 | 第26-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.1 PEDV常规PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2 质粒浓度的计算 | 第28页 |
| 2.3 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR反应条件的优化结果 | 第28-29页 |
| 2.4 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第29页 |
| 2.5 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR的溶解曲线分析 | 第29页 |
| 2.6 PEDV特异性试验结果 | 第29-30页 |
| 2.7 PEDV重复性试验结果 | 第30页 |
| 2.8 PEDV敏感性试验结果 | 第30-31页 |
| 2.9 临床样品检测结果 | 第31页 |
| 3 结论与讨论 | 第31-32页 |
| 试验三 PDCoV与 PEDV双重SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR检测方法的建立 | 第32-41页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 1.1 材料 | 第32页 |
| 1.2 方法 | 第32-35页 |
| 2 结果 | 第35-40页 |
| 2.1 常规PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.2 质粒浓度的计算 | 第36页 |
| 2.3 双重荧光RT-PCR反应条件优化结果 | 第36页 |
| 2.4 双重SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR反应体系的确定 | 第36-37页 |
| 2.5 双重荧光RT-PCR方法溶解曲线及TM值的确定 | 第37页 |
| 2.6 特异性试验结果 | 第37页 |
| 2.7 重复性试验结果 | 第37-39页 |
| 2.8 敏感性试验结果 | 第39页 |
| 2.9 临床腹泻样品检测结果 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 试验四 猪Delta冠状病毒河南流行株全基因序列的测定及遗传变异分析 | 第41-55页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| 1.1 材料 | 第41页 |
| 1.2 引物设计 | 第41-42页 |
| 1.3 病毒RNA的提取、反转录及全基因序列的分段扩增 | 第42-43页 |
| 1.4 PCR产物的回收纯化 | 第43页 |
| 1.5 PDCoV全基因组序列的测定、拼接及遗传变异分析 | 第43-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-53页 |
| 2.1 PDCoV基因组的克隆与序列测定结果 | 第44-45页 |
| 2.2 PDCoV同源性分析 | 第45-46页 |
| 2.3 PDCoV(CH-01 株)遗传进化分析 | 第46-47页 |
| 2.4 PDCoV ORF1 基因及推导的氨基酸分析 | 第47-49页 |
| 2.5 PDCoV S基因及推导的氨基酸分析 | 第49-51页 |
| 2.6 PDCoV M基因及推导的氨基酸分析 | 第51-52页 |
| 2.7 PDCoV N基因及推导的氨基酸分析 | 第52-53页 |
| 3 结论与讨论 | 第53-55页 |
| 全文总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| ABSTRACT | 第61-63页 |
