鸡β-防御素-13成熟肽cDNA的克隆及在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达

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鸡β-防御素-13成熟肽cDNA的克隆及在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达

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鸡β-防御素-13成熟肽cDNA的克隆及在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达

论文目录
摘要	第1-5页
Abstract	第5-7页
英文缩写字母	第7-10页
第一章文献综述	第10-18页
1. 防御素简介	第10-13页
1.1 防御素的种类及分布	第10-11页
1.2 防御素的生物活性	第11-12页
1.2.1 抗细菌与真菌作用	第11-12页
1.2.2 抗病毒与肿瘤细胞作用	第12页
1.3 防御素的主要作用机理	第12-13页
1.3.1 抗菌作用机理	第12-13页
1.3.2 抗病毒与肿瘤细胞作用机理	第13页
2. 鸡防御素研究现状	第13-16页
2.1 鸡防御素的基因工程研究	第14-16页
2.2 鸡防御素的局限性	第16页
3. 鸡防御素的应用前景	第16-17页
4. 本项目研究的目的与意义	第17-18页
第二章鸡Gal-13成熟肽cDNA的原核表达	第18-34页
1. 试验材料	第18-20页
1.1 试验动物	第18页
1.2 质粒与菌株	第18页
1.3 酶和试剂	第18页
1.4 PCR引物设计与合成	第18-19页
1.5 仪器	第19页
1.6 试剂及培养基的配制	第19-20页
2. 试验方法	第20-27页
2.1 鸡Gal-13全长序列的扩增	第20-21页
2.2 pMD18-T-Gal-13质粒的构建	第21-22页
2.2.1 目的片段的回收	第21-22页
2.2.2 目的片段与克隆载体的连接	第22页
2.3 重组质粒的转化及转化子的鉴定	第22-23页
2.4 Gal-13全长序列的测序与分析	第23-24页
2.4.1 重组质粒的提取与测序	第23-24页
2.4.2 Gal-13全长序列的分析及系统发育进化树的构建	第24页
2.5 Gal-13成熟肽的原核表达与鉴定	第24-27页
2.5.1 原核表达载体的构建及鉴定	第24-25页
2.5.2 融合蛋白的诱导表达与鉴定	第25-27页
2.5.3 诱导表达条件的优化及表达产物的可溶性分析	第27页
3. 试验结果	第27-32页
3.1 目的基因的扩增	第27-28页
3.2 序列比对分析及进化树的构建	第28-29页
3.3 成熟肽基因序列的扩增	第29页
3.4 重组菌株的筛选鉴定	第29-30页
3.5 表达产物的鉴定分析	第30-31页
3.6 诱导表达条件的优化	第31-32页
4. 讨论	第32-33页
4.1 Gal-13序列的分析鉴定	第32页
4.2 原核表达系统研究	第32-33页
5. 结论	第33-34页
第三章 Gal-13成熟肽的真核表达	第34-50页
1. 试验材料	第34-36页
1.1 菌株与载体	第34页
1.2 试剂	第34页
1.3 仪器	第34页
1.4 试剂及培养基的配制	第34-36页
2. 试验方法	第36-43页
2.1 Gal-13成熟肽基因序列的扩增	第36页
2.2 重组质粒pPICZαA-Gal-13的构建	第36-37页
2.3 重组质粒转化DH5α大肠杆菌	第37页
2.3.1 重组质粒的转化及转化子的筛选鉴定	第37页
2.4 重组质粒的线性化	第37-38页
2.5 毕赤酵母X-33的电穿孔转化	第38-39页
2.6 重组菌株的鉴定	第39-40页
2.6.1 重组酵母的表型鉴定	第39-40页
2.6.2 高抗性菌株的筛选鉴定	第40页
2.7 重组酵母的诱导表达	第40-41页
2.8 诱导表达产物的Tricine-SDS-PAGE分析	第41-42页
2.9 酵母表达产物的抑菌活性分析	第42-43页
3. 结果	第43-47页
3.1 Gal-13成熟肽序列的扩增	第43页
3.3 重组菌株DH5a的筛选鉴定	第43-46页
3.3.1 重组质粒的线性化与转化	第44-45页
3.3.2 表型鉴定	第45页
3.3.3 高抗性菌株的筛选鉴定	第45-46页
3.4 重组酵母的诱导表达	第46-47页
3.5 表达产物的抑菌活性	第47页
4. 讨论	第47-49页
4.1 酵母表达菌株的选择	第47-48页
4.2 毕赤酵母表达载体的选择	第48-49页
4.3 毕赤酵母的诱导表达	第49页
5. 结论	第49-50页
参考文献	第50-56页
致谢	第56页

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