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LMoV CP原核表达、抗血清制备及叶绿体中的检测

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LMoV CP原核表达、抗血清制备及叶绿体中的检测
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-11页
引言第11-12页
1 文献综述第12-22页
  · 百合及百合病毒病概述第12-16页
    · 百合的特性、经济价值及生产现状第12-13页
    · 百合病毒危害第13页
    · 百合病毒防治第13-14页
    · 百合病毒检测第14-16页
  · LMoV研究进展第16-17页
    · LMoV病原学和病害流行学第17页
    · LMoV分子生物学介绍第17页
  · 植物病毒侵染对寄主的影响第17-19页
    · 植物病毒侵染对寄主光合作用的影响第17-18页
    · 植物病毒侵染对寄主细胞病理学的影响第18页
    · 植物病毒侵染对寄主叶绿体结构的影响第18-19页
    · 植物病毒CP与寄主蛋白互作第19页
    · 植物病毒CP与花叶症状的相关性第19页
  · 蛋白原核表达及抗血清制备第19-21页
    · 大肠杆菌表达系统第19-20页
    · His融合表达系统第20页
    · 病毒编码蛋白作为抗原制备抗血清第20-21页
  · 研究目的、意义及内容第21-22页
    · 研究目的及意义第21页
    · 研究内容第21-22页
2 LMoV CP的克隆第22-32页
  · 实验材料和仪器第22-23页
    · 材料和试剂第22页
    · 常用溶液第22-23页
    · 实验仪器第23页
  · 实验方法第23-27页
    · 感病百合总RNA的提取第23-24页
    · LMoV CP的获得第24-25页
    · 大肠杆菌感受态的制备第25-26页
    · 重组质粒pMD~(TM)18-CP的转化第26页
    · 重组质粒pMD~(TM)18-CP的提取第26-27页
    · 重组质粒pMD~(TM)18-CP的验证第27页
    · 序列分析第27页
  · 结果与分析第27-30页
    · 百合叶片总RNA分析第27-28页
    · LMoV CP的获得第28页
    · 重组质粒pMD~(TM)18-CP的PCR验证第28-29页
    · 重组质粒pMD~(TM)18-CP的双酶切验证第29-30页
    · 测序结果分析第30页
  · 讨论第30-31页
  · 小结第31-32页
3 LMoV CP原核表达及条件优化第32-43页
  · 实验材料和仪器第32-34页
    · 材料和试剂第32页
    · 常用溶液第32-33页
    · 实验仪器第33-34页
  · 实验方法第34-36页
    · 大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备第34页
    · 重组质粒pET28a-CP的转化第34页
    · 重组质粒pET28a-CP的获得和验证第34页
    · pET28a-CP的诱导表达第34页
    · 蛋白样品制备第34-35页
    · 蛋白样品的SDS-PAGE分析第35-36页
    · pET28a-CP诱导表达条件优化第36页
    · 质谱检测第36页
  · 结果与分析第36-41页
    · 重组质粒pET28a-CP的构建第36-37页
    · 重组质粒pET28a-CP的PCR验证第37页
    · 重组质粒pET28a-CP的双酶切验证第37-38页
    · pET28a-CP的诱导表达第38-39页
    · pET28a-CP诱导表达条件的优化第39-41页
    · 质谱分析第41页
  · 讨论第41-42页
  · 小结第42-43页
4 LMoV CP抗血清制备及其应用第43-54页
  · 实验材料和仪器第43-45页
    · 材料和试剂第43页
    · 常用溶液第43-45页
    · 实验仪器第45页
  · 实验方法第45-49页
    · 融合蛋白His-CP的纯化第45-46页
    · 纯化融合蛋白His-CP的SDS-PAGE分析第46页
    · 纯化融合蛋白His-CP的浓度测定第46-47页
    · 纯化融合蛋白His-CP免疫小鼠第47页
    · 间接ELISA法检测抗血清效价第47-48页
    · Western blot检测抗血清特异性第48-49页
    · 百合样品RT-PCR和间接ELISA检测第49页
  · 结果与分析第49-52页
    · 纯化融合蛋白His-CP的SDS-PAGE分析第49页
    · 纯化融合蛋白His-CP浓度的测定第49-50页
    · 抗血清的效价分析第50-51页
    · 抗血清的特异性分析第51页
    · 百合样品RT-PCR和间接ELISA分析第51-52页
  · 讨论第52-53页
  · 小结第53-54页
5 LMoV CP在百合叶绿体中的检测第54-63页
  · 实验材料和仪器第54-55页
    · 材料和试剂第54页
    · 常用溶液第54页
    · 实验仪器第54-55页
  · 实验方法第55-58页
    · 叶绿体超薄切片第55-56页
    · 百合完整游离叶绿体的制备第56-57页
    · 叶绿体总蛋白的抽提第57页
    · LMoV CP叶绿体离体跨膜第57-58页
  · 结果与分析第58-61页
    · LMoV侵染对叶绿体超微结构的影响第58页
    · LMoV CP的免疫金标记定位第58-59页
    · SDS-PAGE和Western blot分析第59-60页
    · LMoV CP蛋白叶绿体离体跨膜运输第60-61页
  · 讨论第61-62页
  · 小结第62-63页
结论第63-64页
展望第64-65页
参考文献第65-71页
附录A 病毒序列第71-72页
附录B 论文所用Marker和质粒图谱第72-74页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第74-75页
致谢第75-76页

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