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稳定表达猪氨肽酶的HEK-293细胞系的构建与初步鉴定

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稳定表达猪氨肽酶的HEK-293细胞系的构建与初步鉴定
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-9页
英文缩略词表第9-15页
第一部分 文献综述第15-22页
  1 猪流行性腹泻概述第15-18页
    · 猪流行性腹泻病毒的分子生物学进展第15-16页
    · PEDV细胞适应性研究第16-17页
    · PEDV细胞受体研究进展第17-18页
  2 猪氨肽酶研究进展第18-21页
    · 猪氨肽酶结构、功能、表达分布第18-19页
    · 表达pAPN细胞系的研究第19-20页
    · pAPN与病毒作用结构域的研究进展第20-21页
  3 本研究的目的与意义第21-22页
第二部分 研究内容第22-60页
  1 材料第22-23页
    · 菌株、毒株第22页
    · 主要试剂第22页
    · 主要仪器第22-23页
  2 方法第23-34页
    · 猪氨肽酶(pAPN)基因的克隆第23-28页
      · 引物设计第23页
      · pAPN基因的扩增第23-25页
      · pAPN基因的克隆第25-26页
      · 克隆重组质粒的鉴定第26-27页
      · pAPN基因编码蛋白的生物信息学分析第27-28页
    · 稳定表达猪氨肽酶的HEK-293细胞系的构建与鉴定第28-32页
      · 真核表达质粒pcDNA3.1-pAPN的构建与鉴定第28页
      · 真核表达质粒的转染与表达第28-30页
      · 细胞系鉴定与稳定性分析第30-32页
    · PEDV感染稳定表达猪氨肽酶HEK293-pAPN细胞系的验证第32-34页
      · PEDV SC-L株的复苏第32页
      · PEDV感染表达猪氨肽酶的HEK-293细胞系的验证第32-33页
      · 荧光定量PCR方法绘制PEDV增殖曲线第33-34页
  3 结果与分析第34-54页
    · 仔猪氨肽酶(pAPN)基因的克隆和分析第34-42页
      · pAPN基因的克隆第34页
      · pAPN基因序列测定第34-38页
      · pAPN基因编码氨基酸分析第38页
      · pAPN基因核苷酸序列进化树分析第38-40页
      · pAPN蛋白信号肽分析第40页
      · pAPN蛋白的跨膜区分析第40-41页
      · pAPN蛋白结构预测第41页
      · 真核表达质粒pcDNA3.1-pAPN的构建第41-42页
    · 表达猪APN的HEK293-pAPN细胞系的建立和鉴定第42-47页
      · HEK293-pAPN细胞系初步鉴定第42-44页
      · HEK293-pAPN细胞系稳定性鉴定第44-47页
    · PEDV感染HEK293-pAPN细胞系的验证实验第47-52页
      · Vero细胞培养PEDV第47-49页
      · PEDV感染HEK293-pAPN细胞的病变第49-50页
      · HEK293-pAPN细胞培养PEDV第50-52页
    · PEDV在HEK293-pAPN细胞和Vero细胞增殖趋势比较第52-54页
  4 讨论第54-59页
    · 氨肽酶基因的选择第54-55页
    · 真核表达质粒的选择第55-56页
    · 目的基因的体外表达第56页
    · 新建细胞系表达氨肽酶的稳定性分析第56-57页
    · 新建HEK293-pAPN细胞系应用第57-59页
  5 结论第59页
  6 研究创新点第59-60页
参考文献第60-67页
致谢第67-68页
附录第68-70页
  1 主要试剂的配置第68-69页
  2 质粒:pcDNA3.1/myc-His(-)A第69-70页
  3 攻读学位期间发表的学术论文第70页

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