四川猪流行性腹泻病毒流行株S基因的分子特征与S蛋白抗原性的初步分析

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四川猪流行性腹泻病毒流行株S基因的分子特征与S蛋白抗原性的初步分析

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四川猪流行性腹泻病毒流行株S基因的分子特征与S蛋白抗原性的初步分析

论文目录
摘要	第1-7页
Abstract	第7-10页
缩略词表	第10-15页
第一部分文献综述	第15-24页
1 猪流行性腹泻研究进展	第15-23页
· 猪流行性腹泻概述	第15页
· 猪流行性腹泻病毒概述	第15-16页
· PEDV的生物学分类及分子生物学特性	第15-16页
· 猪流行性腹泻病毒的培养	第16页
· PEDV结构蛋白研究进展	第16-18页
· PEDV的基因组结构	第16-17页
· PEDV的主要结构蛋白研究进展	第17-18页
· PEDV的诊断方法	第18-20页
· 病原学检测	第18页
· 免疫学方法	第18-19页
· 分子生物学技术	第19-20页
· PEDV的疫苗研究	第20-21页
· 多克隆抗体的制备	第21-23页
· 多克隆抗体的原理	第21-22页
· 多克隆抗体的制备	第22页
· 多克隆抗体的鉴定	第22-23页
2 本研究的目的与意义	第23-24页
第二部分实验研究	第24-75页
第一章四川猪流行性腹泻病毒S基因克隆及分子特征分析	第24-52页
1 材料	第24页
· 材料	第24页
· 主要试剂	第24页
· 主要仪器设备	第24页
2 方法	第24-28页
· 样品的采集	第24页
· 样品的处理	第24-25页
· 病毒RNA的提取	第25页
· PEDV的RT-PCR检测	第25-26页
· cDNA的转录	第25页
· PEDV的PCR初步检测	第25页
· PEDV的PCR检测	第25-26页
· PEDV S基因的扩增	第26-27页
· 引物的设计、合成	第26页
· 目的基因的PCR扩增	第26-27页
· PEDV S基因的克隆鉴定	第27-28页
· PCR产物的回收	第27页
· 目标片段的T载体连接体系	第27页
· 重组载体的转化、克隆	第27-28页
· PEDV S基因的核苷酸序列测定	第28页
3 结果	第28-48页
· 2014年四川地区PEDV的RT-PCR检测结果	第28-32页
· 临床症状及剖检病变	第28-30页
· 病料的RT-PCR检测结果	第30页
· 病料统计结果	第30-32页
· 四川PEDV流行株S基因的RT-PCR扩增	第32-33页
· PEDV S基因的克隆与鉴定	第33-34页
· PCRC产物的胶回收	第33页
· S基因的克隆鉴定	第33-34页
· 四川PEDV流行株S基因的分子特征分析	第34-40页
· 部分S基因核苷酸、氨基酸序列分析	第34-36页
· S基因核苷酸、氨基酸序列分析	第36-39页
· 核苷酸序列密码子偏爱性分析	第39-40页
· S蛋白特性分析	第40-43页
· S蛋白基本特点	第40-41页
· 蛋白疏水性分析	第41页
· 蛋白跨膜区分析	第41-42页
· 蛋白信号肽分析	第42页
· 蛋白二级结构预测	第42-43页
· S蛋白的糖基化位点及抗原位点预测	第43页
· PEDV S基因的系统发育进化分析	第43-48页
4 讨论	第48-51页
· 病料检测结果及病毒流行情况	第48页
· 病料的存放及PCR扩增引物的选择	第48-49页
· PEDVS基因的分子生物学特性分析	第49-51页
5 小结	第51-52页
第二章猪流行性腹泻病毒S蛋白抗原区的表达及多克隆抗体的制备	第52-75页
1 材料及仪器设备	第52-53页
2 方法	第53-58页
· 表达载体pET39b-SC-SD的构建与鉴定	第53-54页
· 引物的设计与合成	第53页
· SD片段PCR扩增	第53页
· 原核表达载体构建	第53-54页
· SD片段的生物特性分析	第54页
· SC-SD片段的表达及重组蛋白的纯化	第54-57页
· SC-SD片段的表达	第54页
· 重组蛋白诱导条件的优化	第54-55页
· 重组蛋白的细胞定位分析	第55页
· 重组蛋白的纯化	第55-56页
· 蛋白浓度测定	第56页
· 重组蛋白的免疫印迹分析	第56-57页
· SD重组蛋白多抗血清的制备、活性鉴定	第57-58页
· SD重组蛋白多抗血清的制备	第57-58页
· SD多抗血清的效价测定	第58页
· 重组蛋白多抗血清的活性鉴定	第58页
3 结果与分析	第58-70页
· SD抗原表位的RT-PCR扩增	第58-59页
· SD片段原核表达载体构建	第59页
· 重组表达质粒的测序	第59-61页
· SD片段的生物特性分析	第61-63页
· 理化性质分析	第61页
· 蛋白的疏水性分析	第61-62页
· 蛋白的抗原表位分析	第62-63页
· SD蛋白结构的预测	第63页
· 重组蛋白的表达及鉴定	第63-67页
· 重组蛋白的初步表达鉴定	第63-66页
· 蛋白诱导条件的优化	第66页
· 重组蛋白的细胞定位分析	第66-67页
· 重组蛋白免疫印迹分析(Western-blotting)	第67页
· 重组蛋白纯化分析及含量测定	第67-68页
· SD重组蛋白多抗血清的制备、活性鉴定	第68-70页
· SD重组蛋白多抗血清的效价测定	第68-69页
· 抗SD多克隆抗体与重组蛋白的反应性	第69-70页
4 讨论	第70-74页
· 目的基因的选择	第70-71页
· 目的蛋白的原核表达	第71-72页
· 重组蛋白的纯化	第72-73页
· 重组蛋白的免疫印迹分析	第73页
· 多克隆抗体的制备及鉴定	第73-74页
5 小结	第74-75页
参考文献	第75-82页
致谢	第82-83页
附录	第83-84页

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