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FLAG-HA-Bad双标签真核表达载体的构建及Bad相互作用蛋白质筛选的串联亲和纯化技术研究
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FLAG-HA-Bad双标签真核表达载体的构建及Bad相互作用蛋白质筛选的串联亲和纯化技术研究
论文目录
摘要
第1-5页
Abstract
第5-8页
第1章 绪论
第8-14页
· 细胞凋亡及特征
第8页
· 细胞凋亡(APOPTOSIS)的生理意义
第8-9页
· BCL-2 家族
第9-10页
· Bad
第10-11页
· Bad与Bcl-2 家族
第11页
· Gelsolin
第11-12页
· 串联亲和纯化
第12-14页
第2章 FLAG-HA-BAD双标签真核表达载体的构建
第14-22页
· 实验材料
第14-15页
· 主要试剂
第14页
· 主要试剂配制
第14页
· 主要实验仪器设备
第14-15页
· 实验方法
第15-19页
· 细胞培养
第15页
· Trizol提取细胞RNA
第15页
· RNA反转录cDNA
第15-16页
· PCR扩增目的基因及基因克隆
第16-17页
· PCR阳性克隆鉴定
第17-18页
· 质粒小量提取
第18页
· 去内毒素质粒大量提取
第18-19页
· 实验结果
第19-21页
· 融合质粒的构建与鉴定
第19-21页
· 实验讨论
第21-22页
第3章 BAD相互作用蛋白质筛选的串联亲和纯化及质谱分析
第22-29页
· 实验材料
第22页
· 主要试剂
第22页
· 主要试剂配制
第22页
· 主要实验仪器设备
第22页
· 实验方法
第22-25页
· 质粒转染细胞
第22-23页
· Western blotting检测蛋白表达
第23-25页
· TAP亲和纯化
第25页
· 质谱检测和分析
第25页
· 实验结果
第25-28页
· 瞬时转染
第25-26页
· TAP亲和纯化及蛋白复合体的分离纯化与鉴定
第26-27页
· 质谱分析
第27-28页
· 实验讨论
第28-29页
第4章 免疫共沉淀(CO-IP)验证蛋白相互作用
第29-32页
· 实验材料
第29页
· 主要试剂和抗体
第29页
· 主要试剂配制
第29页
· 主要实验仪器设备
第29页
· 实验方法
第29-30页
· 免疫共沉淀(Co-IP)验证蛋白相互作用
第29-30页
· 实验结果
第30-31页
· 免疫共沉淀验证Bad与Gelsolin相互作用
第30-31页
· 实验讨论
第31-32页
第5章 讨论
第32-34页
结论
第34-35页
参考文献
第35-38页
致谢
第38-39页
作者简介
第39页
本篇论文共
39
页,
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