猪巨细胞病毒gB蛋白间接ELISA方法的建立及单克隆抗体的制备与鉴定

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猪巨细胞病毒gB蛋白间接ELISA方法的建立及单克隆抗体的制备与鉴定

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猪巨细胞病毒gB蛋白间接ELISA方法的建立及单克隆抗体的制备与鉴定

论文目录
摘要	第1-9页
ABSTRACT	第9-11页
第一篇文献综述	第11-25页
1 生物学特性与病毒蛋白	第11-13页
· 病毒生物学特性	第12页
· 病毒主要蛋白	第12-13页
2 流行病学	第13-14页
3 临床特征和病理变化	第14页
4 诊断技术	第14-18页
· 电镜观察	第14页
· 酶联免疫吸附试验	第14-15页
· 间接免疫荧光试验	第15-16页
· 免疫组织化学技术	第16页
· 分子诊断	第16-18页
· PCR	第16-17页
· 原位杂交技术	第17-18页
5 预防与控制	第18-19页
参考文献	第19-25页
第二篇研究内容	第25-73页
第一章猪巨细胞病毒gB基因原核表达与鉴定	第25-39页
摘要	第25页
1 材料与方法	第25-32页
· 材料	第25-26页
· 方法	第26-32页
· PCMV gB基因的PCR扩增	第26页
· PCR产物回收纯化	第26-27页
· 重组质粒的构建及鉴定	第27-29页
· 重组gB蛋白的表达	第29-31页
· 表达gB蛋白的Western-blotting鉴定	第31-32页
2 结果	第32-34页
· gB基因扩增	第32页
· 重组质粒pET32a-gB双酶切鉴定	第32-33页
· gB基因序列测定	第33页
· 重组gB蛋白的SDS-PAGE电泳结果	第33页
· 表达产物的Western-blotting鉴定结果	第33-34页
3 讨论	第34-36页
参考文献	第36-37页
ABSTRACT	第37-39页
第二章猪巨细胞病毒间接ELISA检测方法的建立与初步应用	第39-59页
摘要	第39-40页
1 材料与方法	第40-44页
· 材料	第40页
· 方法	第40-44页
· 重组gB蛋白表达条件的优化	第40页
· 重组gB蛋白的可溶性鉴定	第40-41页
· 重组gB蛋白的纯化	第41-42页
· 间接ELISA方法的建立及条件优化	第42-43页
· 间接ELISA阴阳性判定标准的建立	第43页
· 特异性试验	第43页
· 敏感性试验	第43-44页
· 重复性试验	第44页
· 临床血清样品检测	第44页
2 结果	第44-53页
· ELISA抗原制备	第44-47页
· 重组gB蛋白表达条件优化	第44-45页
· 重组gB蛋白可溶性检测	第45-46页
· 重组gB蛋白的纯化	第46-47页
· 间接ELISA方法反应条件优化	第47-50页
· 间接ELISA方法阴阳性判定标准的建立	第50页
· 特异性试验	第50-51页
· 敏感性试验	第51页
· 重复性试验	第51-52页
· 临床血清样品的检测	第52-53页
3 讨论	第53-55页
参考文献	第55-57页
ABSTRACT	第57-59页
第三章抗猪巨细胞病毒gB蛋白单克隆抗体研制	第59-73页
摘要	第59页
1 材料和方法	第59-66页
· 主要材料与试剂	第59-60页
· 抗原蛋白和检测蛋白的制备	第60页
· 动物免疫	第60页
· 间接ELISA方法检测免疫后鼠血清效价	第60-61页
· 单抗的制备	第61-63页
· SP2/0骨髓瘤细胞的准备	第61页
· 饲养细胞的准备	第61-62页
· 脾淋巴细胞的准备	第62页
· 细胞融合	第62页
· 杂交瘤细胞的选择性培养	第62页
· 阳性杂交瘤细胞的筛选	第62-63页
· 阳性杂交瘤细胞的亚克隆	第63页
· 杂交瘤细胞的冻存与复苏	第63页
· 腹水的制备	第63页
· 单克隆抗体的鉴定	第63-66页
· 单克隆抗体效价的测定	第63-64页
· 单克隆抗体Ig类的鉴定	第64页
· 单克隆抗体的特异性鉴定	第64-66页
· 杂交瘤细胞分泌抗体稳定性的鉴定	第66页
2 结果	第66-70页
· 杂交瘤细胞株的建立和抗体效价的测定	第66页
· 单克隆抗体的Ig类鉴定	第66-67页
· 单克隆抗体的特异性鉴定	第67-69页
· 单克隆抗体与原核表达的蛋白的反应	第67页
· 单克隆抗体与真核表达的蛋白的反应	第67-69页
· 分泌抗体稳定性的鉴定	第69-70页
3 讨论	第70-71页
参考文献	第71-72页
ABSTRACT	第72-73页
全文总结	第73-75页
附录	第75-79页
致谢	第79 页

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