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猪转基因克隆胚胎体外生产的研究

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猪转基因克隆胚胎体外生产的研究
论文目录
 
目录第1-9页
摘要第9-11页
ABSTRACT第11-14页
符号及縮略语第14-15页
第一部分 文献综述第15-39页
  第一章 哺乳动物体细胞核移植的研究与应用第15-39页
    1 哺乳动物体细胞核移植研究概况第15-16页
    2 体细胞核移植的技术程序第16-29页
      · 受体细胞的选择和去核第16-19页
        · 盲吸法第17页
        · 切割法第17页
        · 荧光引导去核法第17页
        · 化学法第17-18页
        · 极性偏振光显核法第18页
        · Pol-Scope法第18页
        · 离心法第18页
        · 末期去核法第18-19页
        · 徒手切割法第19页
      · 供核细胞准备第19-20页
      · 克隆重构胚构建第20-21页
        · 胞质内注射法第20-21页
        · 带下注射-融合第21页
        · 其它方法第21页
      · 重构胚激活第21-22页
        · 电激活第22页
        · 化学激活第22页
      · 重构胚体外培养第22-23页
      · 影响体细胞核移植的因素第23-29页
        · 受体细胞和供核细胞的核质互作第24-25页
        · 体细胞供体核重编程第25页
        · DNA甲基化第25-27页
        · 组蛋白乙酰化第27页
        · 基因组印记第27-28页
        · 端粒问题第28-29页
    3 体细胞核移植与转基因动物生产第29-37页
      · 转基因动物研究现状第30页
      · 转基因动物制作方法第30-35页
        · 显微注射法第30-31页
        · 体细胞核移植法第31-32页
        · 逆转录病毒感染法第32页
        · 胚胎干细胞法第32-33页
        · RNA干涉转基因技术第33页
        · 精子载体法第33-34页
        · 基因打靶技术第34页
        · 诱导多能干细胞转基因研究第34-35页
      · 转基因技术应用第35-37页
        · 建立研究基因功能和治疗人类疾病的动物模型第35-36页
        · 动物抗病育种第36页
        · 异种器官移植第36页
        · 生物制药第36-37页
    4 动物转基因克隆的前景第37-39页
第二部分 试验研究第39-65页
  第二章 猪转基因克隆技术程序的优化第39-57页
    摘要第39页
    1 材料第39-45页
      · 主要仪器设备第39-40页
      · 主要试剂及药品第40-41页
      · 试剂配置第41-43页
        · TCM-199液配制第41页
        · Hoechst33342染液第41-42页
        · 激素贮存液配制第42页
        · DMEM溶液第42页
        · 无钙镁DPBS液第42页
        · 胰酶消化液的配制第42页
        · 胚胎培养液PZM-3第42页
        · 融合激活液第42-43页
        · 显微操作液:无钙H-NCSU-23第43页
      · 工具的制备第43-45页
        · 显微操作针的制备第43-45页
    2 试验方法第45-50页
      · 卵母细胞采集第45页
      · 猪卵母细胞的体外成熟培养第45-46页
      · 猪耳成纤维细胞和胎儿成纤维细胞的建系和培养第46-47页
        · 胎儿成纤维细胞分离传代培养第46页
        · 猪儿成纤维细胞分离传代培养第46-47页
        · 细胞的冷冻保存第47页
      · 抗猪繁殖与呼吸综合征病毒转基因细胞系的建立第47-48页
      · 转基因供体细胞细胞周期同期化第48页
      · 体细胞核移植第48-49页
        · 转基因供体细胞的准备第48页
        · 受体细胞的准备第48页
        · 重构胚的构建第48-49页
        · 电融合激活第49页
        · 重构胚的体外培养第49页
      · 试验设计第49-50页
        · 激素处理时间对猪卵母细胞成熟发育的影响第49页
        · 细胞周期同期化处理供体细胞对克隆胚胎发育的影响第49-50页
        · 比较细胞的保存方式对猪胚胎发育的影响第50页
        · 不同激活方案对转基因克隆胚胎发育的影响第50页
      · 统计分析第50页
    3 结果第50-52页
      · 激素处理对猪卵母细胞成熟的影响第50-51页
      · 细胞周期同期化处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响第51页
      · 供核细胞保存方式对猪转基因克隆胚胎发育的影响第51-52页
      · 激活方法对猪转基因克隆胚胎发育的影响第52页
    4 讨论第52-57页
      · 激素处理对猪卵母细胞成熟的影响第52-53页
      · 细胞周期同期化处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响第53页
      · 供核细胞保存方式对猪转基因克隆胚胎发育的影响第53-54页
      · 激活方法对猪转基因克隆胚胎发育的影响第54-57页
  第三章 抗猪蓝耳病shRNA转基因克隆胚胎体外生产第57-65页
    摘要第57页
    1 材料第57-58页
      · 主要仪器设备第57页
      · 主要试剂及药品第57-58页
      · 试剂配置第58页
      · 工具的制备第58页
    2 试验方法第58-60页
      · 猪卵母细胞采集和体外成熟培养第58页
      · 供核细胞准备第58-59页
      · 受体细胞准备第59页
      · 核移植操作第59页
      · 重构胚激活第59页
      · 重构胚体外培养第59-60页
      · 试验设计第60页
        · 转基因供体对猪转基因胚胎发育的影响第60页
        · TSA对猪转基因克隆胚胎发育的影响第60页
      · 统计分析第60页
    3 结果第60-62页
      · 转基因核供核细胞对猪转基因胚胎早期发育的影响第60-61页
      · TSA处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响第61-62页
        · TSA处理转基因核供核细胞对猪克隆胚胎发育的影响第61页
        · TSA处理胚胎对猪转基因克隆胚胎发育的影响第61-62页
        · TSA同时处理供核细胞与胚胎对猪转基因克隆胚胎发育的影响第62页
    4 讨论第62-65页
      · 不同转基因核供核细胞对猪转基因克隆胚胎发育的影响第62-63页
      · TSA处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响第63-65页
参考文献第65-77页
全文结论第77-79页
图版及说明第79-83页
致谢第83 页

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