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茶树叶片中硒代半胱氨酸甲基转移酶转录与表达水平的研究
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茶树叶片中硒代半胱氨酸甲基转移酶转录与表达水平的研究
论文目录
摘要
第1-5 页
Abstract
第5-11 页
1 文献综述
第11-17 页
· 硒
第11-12 页
· 茶叶中的硒
第12-13 页
· 硒对茶树的作用
第13 页
· 植物的硒代谢途径
第13-15 页
· 硒代半胱氨酸甲基转移酶(SMT)
第15 页
· 关于富硒食品的研究
第15-16 页
· 植物对硒污染土壤的修复作用
第16-17 页
2 引言
第17-19 页
· 研究意义及目的
第17 页
· 研究内容
第17-18 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究
第17-18 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中表达水平的研究
第18 页
· 技术路线
第18-19 页
3 材料与方法
第19-37 页
· 实验材料
第19 页
· 仪器与试剂
第19-24 页
· 主要实验仪器
第19 页
· 主要试剂
第19-20 页
· 实验中常用试剂配方
第20-24 页
· 实验方法
第24-37 页
· 总RNA 的提取和检测
第24-25 页
· α-tubulin 原核表达载体的构建
第25-30 页
· cDNA 第一链的合成
第25 页
· α-tubulin 全长cDNA 的扩增
第25 页
· 凝胶电泳回收PCR 产物
第25-26 页
· E. coli DH5α感受态的制备
第26-27 页
· PCR 产物与载体的连接
第27 页
· 重组质粒的转化
第27 页
· 重组子的鉴定
第27-28 页
· α-tubulin 原核表达载体的构建
第28 页
· α-tubulin 的原核表达
第28-30 页
· α-tubulin 原核表达条件优化
第30 页
· α-tubulin 的纯化
第30-31 页
· His 标签融合蛋白的纯化(按照Novagen 公司使用说明进行)
第30-31 页
· 包涵体蛋白的纯化
第31 页
· α-tubulin 兔多克隆抗体的制备
第31-33 页
· 抗原的制备
第31-32 页
· α-tubulin 兔抗血清的制备
第32 页
· 多克隆抗体的纯化
第32-33 页
· 茶树叶片总蛋白粗提液的制备
第33 页
· Western blot 检测抗体特异性
第33-34 页
· SMT 兔多克隆抗体的制备及检测
第34 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中表达水平的研究
第34-35 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究
第35-37 页
· 富硒茶与非富硒茶叶片总RNA 的提取与定量
第35 页
· cDNA 一链的合成及定量
第35 页
· 半定量PCR 引物设计
第35 页
· PCR 反应条件的优化
第35-36 页
· 退火温度的优化
第35 页
· 模板量的优化
第35-36 页
· 循环数的优化
第36 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究
第36-37 页
4 结果与分析
第37-48 页
· RNA 的提取与质量检测
第37-38 页
· RNA 的琼脂糖凝胶电泳
第37 页
· 紫外分光光度法检测RNA 纯度
第37-38 页
· cDNA 第一链的电泳检测及浓度测定
第38 页
· α-tubulin 原核表达载体的构建
第38-39 页
· α-tubulin 全长基因克隆
第38-39 页
· 菌落PCR
第39 页
· 双酶切鉴定
第39 页
· α-tubulin 的原核表达
第39-40 页
· α-tubulin 原核表达的优化
第40-42 页
· 最佳诱导温度
第40-41 页
· 最佳诱导IPTG 浓度
第41 页
· 最佳诱导菌液浓度
第41-42 页
· 最佳诱导时间
第42 页
· α-tubulin 的纯化
第42-43 页
· 茶树叶片总蛋白粗提液的制备
第43 页
· α-tubulin 和 SMT 兔多克隆抗体特异性鉴定
第43-44 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中表达水平的研究
第44-45 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究
第45-48 页
· PCR 反应条件的优化
第45-47 页
· 退火温度的优化
第45 页
· 模板量的优化
第45-46 页
· 循环数的优化
第46-47 页
· SMT 在富硒茶与非富硒茶中转录水平的研究
第47-48 页
5 讨论
第48-51 页
· CTAB-LiCl 法提取总 RNA
第48 页
· 半定量PCR
第48 页
· His-Tua 的纯化方式
第48-49 页
· 多克隆抗体的制备方法
第49 页
· SMT 转录与表达水平差异形成的可能原因
第49 页
· 由SMT 转录与表达水平所得的一些关于生产富硒茶的建议
第49-51 页
6 结论
第51-52 页
· α-tubulin 的原核表达
第51 页
· α-tubulin 和 SMT 多克隆抗体的制备
第51 页
· 富硒茶与非富硒茶叶片中SMT 表达水平研究
第51 页
· 富硒茶与非富硒茶叶片中SMT 转录水平研究
第51-52 页
参考文献
第52-56 页
附录A 中英文缩写与注释
第56-58 页
附录B α-tubulin 测序及比对结果
第58-63 页
附录C 蛋白序列比对结果
第63-64 页
致谢
第64-65 页
作者简介
第65 页
成果清单
第65页
本篇论文共
65
页,
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