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巴马小型猪内源性反转录病毒的特性

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巴马小型猪内源性反转录病毒的特性
论文目录
 
引言第1-12页
研究内容第12-45页
  实验一: 猪内源性反转录病毒在巴马小型猪中的存在与表达第12-24页
    1 材料与方法第12-16页
      · 实验材料第12-13页
      · 主要仪器第13页
      · 外周血淋巴细胞的分离第13页
      · PBL DNA的制备第13页
      · PBL总RNA的制备第13-14页
      · 引物的设计与合成第14页
      · PCR检测基因组DNA中PERV前病毒的存在第14-15页
      · RT-PCR检测RNA中PERV的表达第15-16页
      · PCR和RT-PCR分型检测第16页
      · 琼脂糖凝胶电泳第16页
    2 结果第16-22页
      · PCR检测结果第16-17页
      · RT-PCR检测结果第17-19页
      · 分型结果第19-22页
    3 讨论第22-23页
    4 小结第23-24页
  实验二: 巴马小型猪来源的猪内源性反转录病毒在体外对人HEK293细胞的感染第24-34页
    1 材料与方法第25-28页
      · 材料第25页
      · 普通培养基第25页
      · 选择性培养基第25页
      · 胰蛋白酶消化液第25页
      · 细胞的准备第25-26页
      · 细胞的共培养第26页
        · 巴马小型猪外周血淋巴细胞的分离和共培养第26页
        · 共培养细胞的压力筛选第26页
      · 筛选后的细胞基因组DNA和总RNA的制备第26-27页
        · 细胞基因组DNA的制备第26-27页
        · 细胞总RNA的制备第27页
      · 检测共培养细胞中的猪源细胞第27-28页
        · 引物的设计与合成第27页
        · PCR鉴定第27-28页
      · 感染细胞的鉴定第28页
        · PCR鉴定第28页
        · RT-PCR鉴定第28页
    2 结果第28-32页
      · G418抗性293细胞与PBL细胞的共培养第28-29页
      · 筛选后的细胞第29页
      · 正常的HEK293抗性细胞第29-30页
      · 压力筛选结果第30页
      · HEK293细胞感染PERV的PCR鉴定第30-31页
      · HEK293细胞感染PERV的RT-PCR鉴定第31-32页
    3 讨论第32-33页
    4 小结第33-34页
  实验三: 巴马小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆与序列分析第34-45页
    1 材料与方法第34-39页
      · 实验材料第34页
      · 引物的设计与合成第34-35页
      · RNA的制备第35页
      · RT-PCR扩增env全基因第35-36页
      · DNA片段的纯化第36页
      · DAN片段的连接第36-37页
      · E.coli感受态的制备第37页
      · 外源DNA的转化第37-38页
      · 重组质粒的鉴定第38页
      · 质粒的小量制备第38页
      · 质粒的鉴定第38页
      · 序列分析第38-39页
    2 结果第39-43页
      · RT-PCR扩增结果第39页
      · 克隆质粒的PCR鉴定和酶切鉴定第39-40页
      · 序列分析第40-42页
      · 全基因序列第42-43页
    3 讨论第43-44页
    4 小结第44-45页
结论第45-46页
致谢第46-47页
参考文献第47-50页
作者简介第50-51页
英文缩略词表第51 页

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