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马传贫病毒中国株S2基因原核表达及多克隆抗体制备
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马传贫病毒中国株S2基因原核表达及多克隆抗体制备
论文目录
 
摘要第1-4 页
Abstract第4-9 页
1 引言第9-17 页
　　· EIAV 的历史和研究现状第10 页
　　· EIAV 流行病学研究第10-13 页
　　　　· EIAV 感染的控制第10-11 页
　　　　· EIAV 的发病周期第11-12 页
　　　　· 流行性病学调查第12 页
　　　　· EIAV 的病理学表现第12-13 页
　　· EIAV 疫苗的研究进展第13-14 页
　　· EIAV 感染的免疫控制和病毒复制第14-15 页
　　· 病毒的进化第15-16 页
　　· EIAV 分子生物学研究进展第16-17 页
　　　　· EIAV 形态结构和理化特性第16 页
　　　　· EIAV 的基因及其编码蛋白第16-17 页
　　· 本研究课题的目的与意义第17 页
2 实验马传贫病毒中国株S2 基因原核表达及多抗体制备第17-29 页
　　· 材料第17-20 页
　　　　· 菌株与载体第17-18 页
　　　　· 实验动物第18 页
　　　　· 酶类及主要生化试剂第18-19 页
　　　　· 主要试剂的配制第19-20 页
　　　　· 主要仪器第20 页
　　· 实验方法第20-27 页
　　　　· 目的基因的克隆第20-22 页
　　　　　　· 引物的设计与合成第20-21 页
　　　　　　· 基因的PCR 扩增第21 页
　　　　　　· PCR 扩增出S2 基因片段的胶回收第21-22 页
　　　　· S2 基因的鉴定第22-24 页
　　　　　　· S2 基因与载体连接第22 页
　　　　　　· 感受态细胞的制备第22 页
　　　　　　· 连接产物的转化第22-24 页
　　　　· S2 基因原核表达载体构建与鉴定第24 页
　　　　　　· 表达载体PET-30A 制备第24 页
　　　　　　· 连接与转化第24 页
　　　　　　· 重组质粒的筛选和鉴定第24 页
　　　　· 融合蛋白的诱导表达第24-26 页
　　　　　　· 表达菌株的诱导表达第24-25 页
　　　　　　· 融合蛋白的检测第25-26 页
　　　　· 融合蛋白的纯化第26-27 页
　　　　　　· 包涵体样品的准备第26 页
　　　　　　· 融合蛋白的镍柱纯化第26 页
　　　　　　· 透析袋的处理第26-27 页
　　　　　　· 透析法复性重组蛋白第27 页
　　　　　　· 蛋白浓缩与定量第27 页
　　· 抗血清的制备第27-29 页
　　　　· 免疫动物方案确立第27 页
　　　　· 抗体水平的监测第27-28 页
　　　　· 间接ELISA 操作步骤第28 页
　　　　· ELISA 法测定兔血清抗体效价第28 页
　　　　· 抗体的特异性检测第28-29 页
　　　　　　· 表2-2 TRICINE-SDS-PAGE 凝胶的制备第28-29 页
3 结果与分析第29-36 页
　　· 目的基因的获得第29 页
　　· S2 基因的鉴定第29-30 页
　　· 重组表达载体的鉴定第30-31 页
　　　　· PCR 鉴定第30 页
　　　　· 酶切鉴定第30-31 页
　　　　· 序列测定第31 页
　　· 融合蛋白的表达及纯化第31-34 页
　　　　· 大肠杆菌菌株BL21（DE3）中融合蛋白的表达第31-32 页
　　　　· 蛋白表达条件的优化第32-33 页
　　　　· 融合蛋白的纯化第33-34 页
　　· 融合表达蛋白的WB 检测第34 页
　　· 多克隆抗体的鉴定第34-35 页
　　　　· 抗原最适包被浓度和血清最佳稀释度和抗体效价第34-35 页
　　　　· 抗体的特异性检测第35 页
　　· 讨论第35-36 页
　　　　· 关于S2 基因的大肠杆菌表达第35 页
　　　　· 蛋白复性第35-36 页
　　　　· 融合蛋白纯化第36 页
　　　　· 小分子蛋白质TRICINE-SDS-PAGE 电泳第36 页
4. 结论第36-37 页
致谢第37-38 页
参考文献第38-42 页
作者简介第42 页

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