论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8
页 |
| Abstract | 第8-10
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| 前言 | 第10-13
页 |
| 第一部分 人血管内皮生长因子在肿瘤广谱筛查和临床诊断中的应用 | 第13-29
页 |
| 一 恶性肿瘤是全球健康的第一大杀手 | 第13
页 |
| 二 早发现和早诊断是肿瘤防治的关键 | 第13-14
页 |
| 三 VEGF是肿瘤筛查和辅助诊断新的和广谱标志物 | 第14-16
页 |
| (1) VEGF及其受体生物学 | 第14-15
页 |
| (2) Folkman理论与肿瘤生长 | 第15-16
页 |
| 四 血管生长因子(VEGF)是最主要的血管生成刺激因子 | 第16-17
页 |
| (1) VEGF与肿瘤诊断研究进展 | 第16-17
页 |
| (2) VEGF与抗肿瘤治疗研究进展 | 第17
页 |
| 五 VEGF在肿瘤广谱筛查和辅助诊断研究进展 | 第17-20
页 |
| (1) VEGF是肿瘤广谱筛查和辅助诊断血液标志物 | 第17-18
页 |
| (2) VEGF与肿瘤预后 | 第18-19
页 |
| (3) VEGF治疗评估与监测 | 第19
页 |
| (4) VEGF复发的监测 | 第19
页 |
| (5) 几个相关问题 | 第19-20
页 |
| 六 VEGF酶联免疫方法学研究进展 | 第20
页 |
| 七 科学问题和发展方向 | 第20-21
页 |
| 参考文献 | 第21-29
页 |
| 第二部分 hVEGF和sFlt-1在原核表达系统中的克隆、表达、纯化及功能性研究 | 第29-79
页 |
| 一 概述 | 第29-32
页 |
| 二 技术路线 | 第32-33
页 |
| 三 实验材料 | 第33-38
页 |
| 1 大肠杆菌感受态细胞 | 第33
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| 2 载体 | 第33-34
页 |
| 3 分子生物学试剂 | 第34-35
页 |
| 4 化学试剂及药品 | 第35-36
页 |
| 5 仪器设备 | 第36-38
页 |
| 四、 实验方法及过程 | 第38-54
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| 1 VEGF165及sFlt-1目的基因的获得 | 第38-40
页 |
| 2 重组克隆载体pMD19-T/VEGF165和pMD19-T/sFlt-1的构建并转化 | 第40-42
页 |
| 3 重组表达载体pGEX-4T-1/VEGF165和pGEX-4T-1/sFlt-1的构建和转化 | 第42-45
页 |
| 4 目的蛋白VEGF165表达条件的确定 | 第45-47
页 |
| 5 GST-VEGF165和GST-sFlt-1蛋白的大量表达及蛋白与Sepharose 4B胶结合优化 | 第47-48
页 |
| 6 与谷胱甘肽Sepharose 4B胶结合的GST-VEGF165、GST-sFlt-1蛋白的洗脱方法的优化 | 第48-49
页 |
| 7 Western Blot分析GST-VEGF165和GST-sFlt-1两种蛋白表达 | 第49-50
页 |
| 8 纯化后的目的蛋白纯度分析 | 第50
页 |
| 9 纯化后目的蛋白浓度测定 | 第50-52
页 |
| 10 鸡胚尿囊膜实验 | 第52
页 |
| 11 结合实验 | 第52-54
页 |
| 五 实验结果 | 第54-69
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| 1 目的基因的获得 | 第54-55
页 |
| 2 重组克隆载体pMD19—T/VEGF165与pMD19—T/sFlt-1的构建并转化 | 第55
页 |
| 3 重组表达载体pGEX-4T-1/VEGF165、pGEX-4T-1/sFlt-1的构建并转化 | 第55-57
页 |
| 4 目的蛋白VEGF165表达条件的确定4.1观察IPTG诱导下表达菌是否表达目的蛋白 | 第57-60
页 |
| 5 目的蛋白的大量表达及蛋白与Sepharose 4B胶结合并洗脱的优化 | 第60-61
页 |
| 6 纯化后的目的蛋白纯度分析 | 第61-65
页 |
| 7 Western Blot分析GST-VEGF165和GST-sFlt-1两种蛋白表达 | 第65-66
页 |
| 8 尿囊膜实验 | 第66-68
页 |
| 9 结合实验 | 第68-69
页 |
| 六 讨论 | 第69-75
页 |
| 一 pGEX-4T-1/VEGF_(165)和pGEX-4T-1/sFlt-1质粒的构建 | 第69-70
页 |
| 二 GST-VEGF_(165)和GST-sFlt-1蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第70-72
页 |
| 三 表达目的蛋白GST-VEGF_(165)和GST-sFlt-1的大肠杆菌的裂解、纯化 | 第72-73
页 |
| 四 GST-VEGF165和GST-sFlt-1蛋白相关功能性试验 | 第73-75
页 |
| 七 结论 | 第75-76
页 |
| 参考文献 | 第76-79
页 |
| 附录 | 第79-88
页 |
| 一 英文缩略语 | 第79-80
页 |
| 二 溶液配制 | 第80
页 |
| 三 培养基的配制 | 第80-81
页 |
| 四 纯化过程中用到的溶液的配制 | 第81-82
页 |
| 五 基因序列 | 第82-88
页 |
| 硕士在读期间发表论文 | 第88-89
页 |
| 致谢 | 第89页 |
