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慢病毒载体介导B型血友病基因治疗研究
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慢病毒载体介导B型血友病基因治疗研究
论文目录
摘要
第1-6页
ABSTRACT
第6-7页
英文缩略词表
第12-13页
第一章 绪论
第13-19页
1.1 B型血友病介绍
第13-14页
1.1.1 病理和病症
第13页
1.1.2 FⅨ基因与蛋白质介绍
第13-14页
1.1.3 FⅨ的活化
第14页
1.2 凝血反应机制
第14-15页
1.3 B型血友病目前治疗现状
第15-16页
1.4 基因治疗介绍
第16-17页
1.4.1 慢病毒载体
第16页
1.4.2 慢病毒介导基因治疗策略及合理性
第16-17页
1.5 MSC的介绍及其相关应用
第17-18页
1.6 启动子介绍
第18-19页
第二章 材料与方法
第19-36页
2.1 细胞的培养方法
第19-20页
2.1.1 仪器与设备
第19页
2.1.2 材料与试剂
第19页
2.1.3 溶液配制
第19页
2.1.4 实验方法
第19-20页
2.2 病毒的包装及滴度的检测
第20-21页
2.2.1 仪器与设备
第20-21页
2.2.2 材料与试剂
第21页
2.2.3 实验方法
第21页
2.3 DNA提取及实时荧光定量PCR
第21-23页
2.3.1 仪器与设备
第21页
2.3.2 材料与试剂
第21-22页
2.3.3 实验方法
第22-23页
2.4 过表达FⅨ细胞系建立及相关检测
第23-25页
2.4.1 仪器与设备
第23页
2.4.2 材料与试剂
第23页
2.4.3 实验方法
第23-25页
2.5 RNA的提取、反转录以及核酸电泳
第25-28页
2.5.1 仪器与设备
第25页
2.5.2 材料与试剂
第25页
2.5.3 实验方法
第25-28页
2.6 蛋白提取及Western blot
第28-30页
2.6.1 仪器与设备
第28页
2.6.2 材料与试剂
第28页
2.6.3 溶液配制
第28-29页
2.6.4 实验方法
第29-30页
2.7 FⅨ蛋白质的定量检测ELISA
第30-32页
2.7.1 仪器与设备
第30-31页
2.7.2 材料与试剂
第31页
2.7.3 溶液配制
第31页
2.7.4 实验方法
第31-32页
2.8 细胞免疫沉淀(ICS)
第32-33页
2.8.1 仪器与设备
第32页
2.8.2 材料与试剂
第32页
2.8.3 溶液配制
第32-33页
2.8.4 实验方法
第33页
2.9 FⅨ蛋白质的活性测试
第33-34页
2.9.1 仪器与设备
第33页
2.9.2 材料与试剂
第33页
2.9.3 实验方法
第33-34页
2.10 去糖基化实验
第34-35页
2.10.1 仪器与设备
第34页
2.10.2 材料与试剂
第34页
2.10.3 试剂配制
第34页
2.10.4 实验方法
第34-35页
2.11 Monensin蛋白转运抑制试验
第35页
2.11.1 仪器与设备
第35页
2.11.2 材料与试剂
第35页
2.11.3 溶液配制
第35页
2.11.4 实验方法
第35页
2.12 本章小结
第35-36页
第三章 LV-EF1α-FⅨ在MSC中的表达
第36-44页
3.1 绪论
第36页
3.2 实验结果
第36-43页
3.2.1 Titer的检测
第36-37页
3.2.2 转染细胞VCN检测
第37-38页
3.2.3 RNA水平检测
第38页
3.2.4 FⅨ蛋白表达检测——Western blot
第38页
3.2.5 胞内FⅨ蛋白检测——ICS
第38-39页
3.2.6 FⅨ活性检测
第39-40页
3.2.7 FⅨ翻译后修饰检测
第40-43页
3.3 本章小节
第43-44页
第四章 内皮启动子特异性表达验证
第44-47页
4.1 绪论
第44页
4.2 FⅨ过表达细胞系建立(EAhy926和K562)
第44-46页
4.2.1 Titer检测
第44-45页
4.2.2 VCN检测
第45页
4.2.3 RNA表达水平
第45-46页
4.2.4 FⅨ蛋白水平表达
第46页
4.3 本章小结
第46-47页
第五章 VEC和KDR启动子在MSC中表达应用
第47-52页
5.1 绪论
第47页
5.2 实验结果
第47-51页
5.2.1 VCN检测
第47页
5.2.2 Western blot: FⅨ蛋白质表达水平检测
第47-49页
5.2.3 ELISA: MSC表达FⅨ定量检测
第49页
5.2.4 MSC表达FⅨ活性检测
第49-50页
5.2.5 Vitamin K依赖性实验
第50-51页
5.3 本章小结
第51-52页
第六章 全文总结与展望
第52-54页
6.1 全文总结
第52页
6.2 后续工作展望
第52-54页
致谢
第54-55页
参考文献
第55-58页
本篇论文共
58
页,
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