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慢病毒载体介导B型血友病基因治疗研究

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慢病毒载体介导B型血友病基因治疗研究
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-7页
英文缩略词表第12-13页
第一章 绪论第13-19页
    1.1 B型血友病介绍第13-14页
        1.1.1 病理和病症第13页
        1.1.2 FⅨ基因与蛋白质介绍第13-14页
        1.1.3 FⅨ的活化第14页
    1.2 凝血反应机制第14-15页
    1.3 B型血友病目前治疗现状第15-16页
    1.4 基因治疗介绍第16-17页
        1.4.1 慢病毒载体第16页
        1.4.2 慢病毒介导基因治疗策略及合理性第16-17页
    1.5 MSC的介绍及其相关应用第17-18页
    1.6 启动子介绍第18-19页
第二章 材料与方法第19-36页
    2.1 细胞的培养方法第19-20页
        2.1.1 仪器与设备第19页
        2.1.2 材料与试剂第19页
        2.1.3 溶液配制第19页
        2.1.4 实验方法第19-20页
    2.2 病毒的包装及滴度的检测第20-21页
        2.2.1 仪器与设备第20-21页
        2.2.2 材料与试剂第21页
        2.2.3 实验方法第21页
    2.3 DNA提取及实时荧光定量PCR第21-23页
        2.3.1 仪器与设备第21页
        2.3.2 材料与试剂第21-22页
        2.3.3 实验方法第22-23页
    2.4 过表达FⅨ细胞系建立及相关检测第23-25页
        2.4.1 仪器与设备第23页
        2.4.2 材料与试剂第23页
        2.4.3 实验方法第23-25页
    2.5 RNA的提取、反转录以及核酸电泳第25-28页
        2.5.1 仪器与设备第25页
        2.5.2 材料与试剂第25页
        2.5.3 实验方法第25-28页
    2.6 蛋白提取及Western blot第28-30页
        2.6.1 仪器与设备第28页
        2.6.2 材料与试剂第28页
        2.6.3 溶液配制第28-29页
        2.6.4 实验方法第29-30页
    2.7 FⅨ蛋白质的定量检测ELISA第30-32页
        2.7.1 仪器与设备第30-31页
        2.7.2 材料与试剂第31页
        2.7.3 溶液配制第31页
        2.7.4 实验方法第31-32页
    2.8 细胞免疫沉淀(ICS)第32-33页
        2.8.1 仪器与设备第32页
        2.8.2 材料与试剂第32页
        2.8.3 溶液配制第32-33页
        2.8.4 实验方法第33页
    2.9 FⅨ蛋白质的活性测试第33-34页
        2.9.1 仪器与设备第33页
        2.9.2 材料与试剂第33页
        2.9.3 实验方法第33-34页
    2.10 去糖基化实验第34-35页
        2.10.1 仪器与设备第34页
        2.10.2 材料与试剂第34页
        2.10.3 试剂配制第34页
        2.10.4 实验方法第34-35页
    2.11 Monensin蛋白转运抑制试验第35页
        2.11.1 仪器与设备第35页
        2.11.2 材料与试剂第35页
        2.11.3 溶液配制第35页
        2.11.4 实验方法第35页
    2.12 本章小结第35-36页
第三章 LV-EF1α-FⅨ在MSC中的表达第36-44页
    3.1 绪论第36页
    3.2 实验结果第36-43页
        3.2.1 Titer的检测第36-37页
        3.2.2 转染细胞VCN检测第37-38页
        3.2.3 RNA水平检测第38页
        3.2.4 FⅨ蛋白表达检测——Western blot第38页
        3.2.5 胞内FⅨ蛋白检测——ICS第38-39页
        3.2.6 FⅨ活性检测第39-40页
        3.2.7 FⅨ翻译后修饰检测第40-43页
    3.3 本章小节第43-44页
第四章 内皮启动子特异性表达验证第44-47页
    4.1 绪论第44页
    4.2 FⅨ过表达细胞系建立(EAhy926和K562)第44-46页
        4.2.1 Titer检测第44-45页
        4.2.2 VCN检测第45页
        4.2.3 RNA表达水平第45-46页
        4.2.4 FⅨ蛋白水平表达第46页
    4.3 本章小结第46-47页
第五章 VEC和KDR启动子在MSC中表达应用第47-52页
    5.1 绪论第47页
    5.2 实验结果第47-51页
        5.2.1 VCN检测第47页
        5.2.2 Western blot: FⅨ蛋白质表达水平检测第47-49页
        5.2.3 ELISA: MSC表达FⅨ定量检测第49页
        5.2.4 MSC表达FⅨ活性检测第49-50页
        5.2.5 Vitamin K依赖性实验第50-51页
    5.3 本章小结第51-52页
第六章 全文总结与展望第52-54页
    6.1 全文总结第52页
    6.2 后续工作展望第52-54页
致谢第54-55页
参考文献第55-58页

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