论文目录 | |
摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
常见缩略词表 | 第8-13页 |
第一章 绪论 | 第13-20页 |
1.1 基因治疗简介 | 第13页 |
1.2 CRISPR基因编辑系统简介 | 第13-15页 |
1.3 CRISPR递送载体的研究进展 | 第15-17页 |
1.4 非病毒类载体材料壳聚糖 | 第17-18页 |
1.5 本文的主要贡献与创新 | 第18页 |
1.6 本文的结构安排 | 第18-20页 |
第二章 CRISPR基因编辑质粒的构建及测定 | 第20-31页 |
2.1 材料与仪器 | 第20-23页 |
2.1.1 主要试剂材料 | 第20-21页 |
2.1.2 所需实验仪器 | 第21-22页 |
2.1.3 常用试剂的配制 | 第22-23页 |
2.2 实验方法 | 第23-28页 |
2.2.1 CRISPR基因编辑质粒的构建 | 第23-26页 |
2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
2.2.3 连接产物的转化 | 第26-27页 |
2.2.4 连接产物的扩增 | 第27页 |
2.2.5 重组质粒的提取 | 第27-28页 |
2.2.6 重组质粒的基因测序 | 第28页 |
2.3 实验结果与讨论 | 第28-29页 |
2.3.1 CRISPR All-In-One表达质粒的浓度及纯度检测结果 | 第28页 |
2.3.2 CRISPR All-In-One表达质粒的基因测序结果 | 第28-29页 |
2.4 本章小结 | 第29-31页 |
第三章 改性壳聚糖类载体材料TMC的制备与表征 | 第31-37页 |
3.1 材料与仪器 | 第32-33页 |
3.1.1 主要原料与试剂 | 第32页 |
3.1.2 所需实验仪器 | 第32-33页 |
3.1.3 常用试剂的配置 | 第33页 |
3.2 实验方法 | 第33-34页 |
3.2.1 改性壳聚糖类材料TMC的合成 | 第33-34页 |
3.2.2 ~1HNMR核磁共振波谱分析 | 第34页 |
3.2.3 傅立叶红外透射光谱分析 | 第34页 |
3.3 结果与讨论 | 第34-36页 |
3.3.1 TMC的~1H NMR结果 | 第34-35页 |
3.3.2 TMC的FT-IR结果 | 第35-36页 |
3.4 本章小结 | 第36-37页 |
第四章 壳聚糖类材料载CRISPR纳米复合物的构建 | 第37-45页 |
4.1 材料与仪器 | 第38-39页 |
4.1.1 主要材料与试剂 | 第38页 |
4.1.2 所需实验仪器 | 第38页 |
4.1.3 常用试剂的配置 | 第38-39页 |
4.2 实验方法 | 第39-41页 |
4.2.1 壳聚糖类材料载CRISPR纳米复合物的构建 | 第39-40页 |
4.2.2 壳聚糖类材料载CRISPR纳米复合物的凝胶阻滞分析 | 第40-41页 |
4.2.3 壳聚糖类材料载CRISPR纳米复合物的动态光散射分析 | 第41页 |
4.3 结果与讨论 | 第41-43页 |
4.3.1 壳聚糖类材料载CRISPR纳米复合物的凝胶电泳阻滞情况 | 第41-42页 |
4.3.2 壳聚糖类材料载CRISPR纳米复合物的DLS评价 | 第42-43页 |
4.4 本章小结 | 第43-45页 |
第五章 壳聚糖类材料对CRISPR的递送性能分析 | 第45-58页 |
5.1 材料与仪器 | 第46-47页 |
5.1.1 主要材料及试剂 | 第46页 |
5.1.2 所需实验仪器 | 第46-47页 |
5.1.3 常用试剂的配置 | 第47页 |
5.2 实验方法 | 第47-52页 |
5.2.1 细胞培养 | 第47-49页 |
5.2.2 转染细胞 | 第49-51页 |
5.2.3 流式细胞术检测转染效率 | 第51页 |
5.2.4 MTT比色法检测细胞生存率 | 第51-52页 |
5.3 结果与讨论 | 第52-55页 |
5.3.1 壳聚糖类材料介导CRISPR基因编辑质粒实现有效转染 | 第52-54页 |
5.3.2 壳聚糖类材料载CRISPR纳米复合物的安全性评价 | 第54-55页 |
5.4 本章小结 | 第55-58页 |
第六章 全文总结与展望 | 第58-61页 |
6.1 全文总结 | 第58-60页 |
6.2 后续工作展望 | 第60-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-68页 |
攻读硕士学位期间取得的成果 | 第68页 |