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问号钩端螺旋体LA 2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究

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问号钩端螺旋体LA 2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究
论文目录
 
致谢第1-5页
中文摘要第5-7页
Abstract第7-8页
英文缩写词表第9-13页
第一章 引言第13-18页
    1.1 钩端螺旋体第13页
    1.2 钩端螺旋体病第13页
    1.3 血小板活化因子乙酰水解酶第13-15页
    1.4 磷脂酶A_2第15-16页
    1.5 研究内容和目的第16-17页
        1.5.1 研究内容第16-17页
        1.5.2 研究目的第17页
    1.6 研究路线第17-18页
第二章 问号钩端螺旋体LA_2144基因原核表达系统构建及抗血清制备第18-40页
    2.1 实验材料第18-24页
        2.1.1 实验质粒第18页
        2.1.2 实验菌株第18页
        2.1.3 实验动物第18页
        2.1.4 主要实验试剂第18-20页
        2.1.5 相关溶液配制第20-22页
        2.1.6 主要实验耗材与实验仪器第22-24页
    2.2 实验方法第24-36页
        2.2.1 问号钩体LA_2144基因产物生物信息学分析第24页
        2.2.2 问号钩体的培养第24页
        2.2.3 问号钩体基因组DNA的提取第24-25页
        2.2.4 问号钩端螺旋体LA_2144基因的扩增第25-27页
        2.2.5 E.coli DH5α和E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备第27页
        2.2.6 LA_2144基因的T-A克隆第27-30页
        2.2.7 LA_2144基因的原核表达系统的构建第30-31页
        2.2.8 rLep2144表达与SDS-PAGE第31-32页
        2.2.9 14 KDa透析袋的使用第32-33页
        2.2.10 rLep2144蛋白纯化第33-34页
        2.2.11 rLep2144蛋白复性第34页
        2.2.12 兔抗rLep2144-IgG的制备第34-35页
        2.2.13 免疫双向扩散法检测rLep2144-IgG的效价第35-36页
    2.3 实验结果第36-40页
        2.3.1 问号钩体LA_2144基因产物生物信息学分析第36-37页
        2.3.2 问号钩端螺旋体LA_2144基因引物设计及PCR产物结果第37-38页
        2.3.3 rLep2144克隆表达纯化及兔rLep2144-IgG的制备第38-40页
第三章 rLep2144的酶活性检测第40-47页
    3.1 实验材料第40页
        3.1.1 主要试剂第40页
        3.1.2 主要实验耗材与实验仪器第40页
    3.2 实验方法第40-43页
        3.2.1 rLep2144蛋白浓度的测定第40-41页
        3.2.2 rLep2144的PAF-AH活性测定第41-42页
        3.2.3 rLep2144水解2-thio PAF底物的Km和Kcat值测定第42页
        3.2.4 rLep2144的PLA_2活性检测第42-43页
    3.3 实验结果第43-47页
        3.3.1 rLep2144的PAF-AH活性测定结果第43-44页
        3.3.2 rLep2144水解2-thio PAF底物的Km和Kcat值测定第44-45页
        3.3.3 rLep2144的PLA_2活性测定第45-47页
第四章 问号钩端螺旋体感染内皮细胞后钩体内Lep2144的表达及外分泌情况第47-60页
    4.1 实验材料第47-50页
        4.1.1 主要实验株及培养第47页
        4.1.2 主要细胞株及培养第47页
        4.1.3 主要试剂第47-48页
        4.1.4 相关溶液配制第48-49页
        4.1.5 主要实验耗材与实验仪器第49-50页
    4.2 实验方法第50-55页
        4.2.1 RT-PCR引物的设计第50页
        4.2.2 问号钩体感染细胞模型的建立第50-51页
        4.2.3 问号钩体Lep2144的mRNA水平检测第51-53页
        4.2.4 问号钩体内Lep2144蛋白表达检测第53-54页
        4.2.5 问号钩体内Lep2144蛋白外分泌表达第51-55页
    4.3 实验结果第55-60页
        4.3.1 感染细胞问号钩体Lep2144-mRNA水平第55-56页
        4.3.2 问号钩体内Lep2144蛋白表达实验结果第56-58页
        4.3.3 问号钩体内Lep2144外分泌检测结果第58-60页
第五章 讨论第60-63页
参考文献第63-69页
综述第69-79页
    参考文献第74-79页
附录1第79-80页
作者简历与攻读学位期间所取得的科研成果第80页

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