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重组人和果蝇乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中分泌表达及对农药敏感性评估

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重组人和果蝇乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中分泌表达及对农药敏感性评估
论文目录
 
致谢第1-7页
中文摘要第7-10页
Abstract第10-12页
缩略词第13-18页
第一章 引言第18-27页
    1.1 引言第18页
    1.2 农药残留现状第18-20页
        1.2.1 我国农药使用现状第18-19页
        1.2.2 农药残留现状第19页
        1.2.3 农药残留对人类的危害第19-20页
    1.3 农药残留主要检测技术第20-22页
        1.3.1 基于酶抑制法原理的速测法技术第20-21页
        1.3.2 色谱快速检测技术第21-22页
        1.3.3 酶联免疫技术第22页
    1.4 乙酰胆碱酯酶研究现状第22-23页
        1.4.1 乙酰胆碱酯酶的来源现状第22-23页
        1.4.2 乙酰胆碱酯酶敏感性现状第23页
    1.5 外源蛋白表达系统第23-26页
        1.5.1 大肠杆菌表达系统第23-24页
        1.5.2 毕赤酵母表达系统第24-25页
        1.5.3 杆状病毒表达系统第25-26页
    1.6 研究目的及意义第26-27页
第二章 材料与方法第27-42页
    2.1 材料第27-31页
        2.1.1 质粒和菌株第27页
        2.1.2 实验试剂第27页
        2.1.3 主要溶液配制第27-31页
        2.1.4 仪器设备第31页
    2.2 hAChE基因在毕赤酵母中表达第31-36页
        2.2.1 hAChE基因克隆第31-32页
        2.2.2 表达载体pPIC9K-hAChE的构建、转化与筛选第32-35页
        2.2.3 重组酵母GS115/pPIC9K-hAChE的菌落PCR鉴定第35页
        2.2.4 重组酵母GS115/pPIC9K-hAChE的诱导表达第35-36页
        2.2.5 表达产物的纯化第36页
    2.3 dmAChE基因在毕赤酵母中表达第36-40页
        2.3.1 dmAChE基因克隆第36-37页
        2.3.2 表达载体pPIC9K-dmAChE的构建、转化与筛选第37-39页
        2.3.3 重组酵母GS115/pPIC9K-dmAChE的菌落PCR鉴定第39页
        2.3.4 重组酵母GS115/pPIC9K-dmAChE的诱导表达第39页
        2.3.5 表达产物的纯化第39-40页
    2.4 酶活测定第40-41页
    2.5 农药敏感性实验第41-42页
第三章 结果与分析第42-56页
    3.1 hAChE基因在毕赤酵母中表达第42-48页
        3.1.1 AChE基因克隆第42页
        3.1.2 表达载体pPIC9K-hAChE的构建第42-45页
        3.1.3 表达载体pPIC9K-hAChE的转化与筛选第45页
        3.1.4 重组酵母GS115/pPIC9K-hAChE的菌落PCR鉴定第45-46页
        3.1.5 hAChE重组蛋白的表达与纯化第46-48页
        3.1.6 hAChE对8种农药敏感性比较第48页
    3.2 dmAChE基因在毕赤酵母中表达第48-56页
        3.2.1 dmAChE基因克隆第48-49页
        3.2.2 表达载体pPIC9K-dmAChE的构建第49-51页
        3.2.3 表达载体pPIC9K-dmAChE的转化与筛选第51-52页
        3.2.4 重组酵母GS115/pPIC9K-dmAChE的菌落PCR鉴定第52页
        3.2.5 dmAChE重组蛋白的表达与纯化第52-54页
        3.2.6 dmAChE对8种农药敏感性比较第54-56页
第四章 讨论第56-59页
    4.1 毕赤酵母表达水平改进第56-57页
        4.1.1 基因剂量对表达量的影响第56页
        4.1.2 酵母自身分泌的蛋白酶对表达量的影响第56-57页
        4.1.3 密码子偏好性对表达量的影响第57页
    4.2 酶活测定条件优化第57-58页
        4.2.1 酶活测定条件单因素实验第57页
        4.2.2 正交试验法优化反应体系条件第57-58页
    4.3 酶的敏感性和表达量改进研究第58页
        4.3.1 敏感性改进第58页
        4.3.2 表达量改进第58页
    4.4 针对GS115/pPIC9K-dmAChE功能探索第58-59页
    4.5 结论及后续工作建议第59页
第五章 结论第59-60页
参考文献第60-68页
综述第68-77页
    1.1 引言第68页
    1.2 农药残留现状第68-70页
        1.2.1 我国农药使用现状第68-69页
        1.2.2 农药残留现状第69页
        1.2.3 农药残留对人类的危害第69-70页
    1.3 农药残留主要的检测技术第70-73页
        1.3.1 几种常见的农药检测技术第70-72页
        1.3.2 酶抑制法检测技术原理第72-73页
    1.4 外源蛋白表达系统研究现状第73-75页
        1.4.1 大肠杆菌表达系统第73页
        1.4.2 毕赤酵母表达系统第73-74页
        1.4.3 杆状病毒表达系统第74-75页
    1.5 乙酰胆碱酯酶研究进展第71-77页
        1.5.1 国内外关于乙酰胆碱酯酶基因克隆和表达系统的研究现状第71-77页
            1.5.1.1 聚合酶链式反应(PCR)第75页
            1.5.1.2 反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)第71-76页
            1.5.1.3 定点突变技术第76-77页
作者简历及在读期间所取得的科研成果第77-78页
附录第78-84页

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