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基于耳聋特异性诱导多能干细胞研究m.7511T>C突变和YARS2 c.572G>T突变对线粒体功能的影响

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基于耳聋特异性诱导多能干细胞研究m.7511T>C突变和YARS2 c.572G>T突变对线粒体功能的影响
论文目录
 
致谢第1-5页
中文摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 绪论第12-23页
    1.1 线粒体与线粒体DNA第12-16页
        1.1.1. 线粒体的起源第12-13页
        1.1.2. 线粒体DNA第13-14页
        1.1.3. 线粒体功能第14-15页
        1.1.4. 线粒体疾病第15-16页
    1.2 耳聋疾病第16-19页
        1.2.1. 耳聋与耳聋的分类第16页
        1.2.2. 与非综合征型耳聋相关的线粒体基因突变第16-17页
        1.2.3. 线粒体氨酰-tRNA合成酶(AARS2)第17-19页
    1.3 诱导多能性干细胞(iPSC)技术的研究与iPS细胞发展第19-23页
        1.3.1. 诱导多能性干细胞(iPSC)第19-21页
        1.3.2. 患者组织特异性iPS细胞模型第21页
        1.3.3. iPS细胞的潜在应用第21-23页
第二章 实验材料和方法第23-54页
    2.1 实验材料第23页
    2.2 实验仪器第23-25页
    2.3 实验试剂及配制第25-32页
    2.4 实验方法第32-54页
        2.4.1 血液DNA及细胞DNA的提取方法第32-33页
        2.4.2 PCR扩增及测序第33-35页
        2.4.3 永生化淋巴细胞的培养第35-36页
        2.4.4 Western Blot检测蛋白表达量第36-39页
        2.4.5 Northern Blot印记杂交实验第39-41页
        2.4.6 ATP检测第41-42页
        2.4.7 线粒体内活性氧(ROS)水平检第42-43页
        2.4.8 线粒体膜电势(MMP)检测第43页
        2.4.9 Annexin V和PI双染检测细胞凋亡第43-44页
        2.4.10 永生化淋巴细胞系重编程为诱导性多能干细胞第44-48页
        2.4.11 iPS细胞突变位点测序第48页
        2.4.12 iPS细胞碱性磷酸酶染色第48-49页
        2.4.13 iPS细胞免疫荧光染色第49-50页
        2.4.14 iPS细胞标志基因的RT-PCR检测第50-52页
        2.4.15 iPS细胞体外拟胚体分化实验第52-53页
        2.4.16 iPS细胞体内畸胎瘤形成实验第53-54页
第三章 实验结果第54-71页
    3.1 非综合征型耳聋家系分析和临床评估第51-58页
        3.1.1 携带m.7511T>C及YARS2 c.572G>T突变家系的发现第54页
        3.1.2 携带m.7511T>C及YARS2 c.572G>T突变耳聋家系的临床表型第51-56页
        3.1.3 线粒体基因及YARS2基因突变检测分析第56-58页
    3.2 携带m.751T>C及YARS2 c.572G>T突变对线粒体功能的影响第58-62页
        3.2.1 YARS2 c.572G>T突变影响YARS2三维结构稳定性第58-59页
        3.2.2 m.7511T>C突变影响tRNA~(Ser)(UCN)结构稳定性第59-60页
        3.2.3 携带m.7511T>C及YARS2 c.572G>T突变导致YARS2蛋白表达量减少第60页
        3.2.4 携带m.7511T>C及YARS2 c.572G>T突变导致tRNA稳态水平显著降低第60-61页
        3.2.5 m.7511T>C及YARS2 c.572G>T突变导致凋亡水平上升第61-62页
    3.3 永生化淋巴细胞系重编程为诱导多功能干细胞第62-68页
        3.3.1 附加体质粒法重编程永生化淋巴细胞系第62-63页
        3.3.2 诱导多功能干细胞(iPSC)克隆的形成第63-64页
        3.3.3 iPS细胞m.7511T>C及YARS2 c.572G>T突变的检测第64-65页
        3.3.4 iPS细胞的碱性磷酸酶染色检测第65页
        3.3.5 iPS细胞干性标志基因的检测第65-66页
        3.3.6 iPS细胞特异性标志蛋白的免疫荧光检测第66页
        3.3.7 iPS细胞体外拟胚体分化实验第66-68页
        3.3.8 iPS细胞体内畸胎瘤形成实验第68页
    3.4 诱导多能性干细胞研究携带m.7511T>C及YARS2 c.572G>T突变对线粒体功能的检测第68-71页
        3.4.1 线粒体ATP生成水平和ROS产量未有显著性变化第68-69页
        3.4.2 线粒体膜电势水平未有显著性变化第69-70页
        3.4.3 细胞凋亡水平上升第70-71页
第四章 讨论与展望第71-73页
参考文献第73-79页
作者简介及硕士期间科研成果第79页

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