论文目录 | |
摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-13页 |
第一章 绪论 | 第13-22页 |
· 判断重组基因克隆的方法概述 | 第13-18页 |
· 大肠杆菌表达系统中重组子筛选方法及实际工作中遇到的问题 | 第18-19页 |
· 红色荧光蛋白的介绍 | 第19页 |
· 该论文的研究目的 | 第19页 |
· 关于本文所采用的试剂、方法、仪器等的说明 | 第19-22页 |
第二章 不同类型启动子对于构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的影响 | 第22-36页 |
第一节 利用T7启动子构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的初步尝试 | 第22-30页 |
· 引言 | 第22页 |
· 实验方法 | 第22-24页 |
· 用T7启动子系统(pET-28a质粒)构建红色荧光蛋白表达载体 | 第22-24页 |
· 对pET-28aRFP质粒的测序验证 | 第24页 |
· 结果与讨论 | 第24-28页 |
· 用T7正向测序结果 | 第24-25页 |
· 用T7ter反向测序结果 | 第25-26页 |
· 正反向测序结果拼接得到pET-28aRFP重组基因正确编码序列 | 第26-28页 |
· pET-28aRFP重组质粒转化大肠杆菌的现象与分析 | 第28页 |
· 小结 | 第28-30页 |
第二节 利用组成型lac启动子构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的改进尝试 | 第30-33页 |
· 引言 | 第30页 |
· 实验方法 | 第30页 |
· 利用lac启动子(pEZZ18质粒)构建红色荧光蛋白表达载体 | 第30页 |
· 结果与讨论 | 第30-32页 |
· pEZZ18-RFP重组质粒转化大肠杆菌后菌落颜色特点分析 | 第30-32页 |
· 小结 | 第32-33页 |
第三节 利用杂合强诱导型tac启动子构建红色荧光蛋白大肠杆菌表达载体的改进尝试 | 第33-36页 |
· 引言 | 第33页 |
· 实验方法 | 第33页 |
· 结果与讨论 | 第33-36页 |
第三章 RFP(DsRed2)的全基因合成 | 第36-46页 |
· 对FRP原始基因(DsRed2)序列的分析 | 第36-37页 |
· 实验方法 | 第37-41页 |
· RFP(DsRed2)基因序列的优化和全基因合成设计 | 第37-41页 |
· 用全基因合成的RFP(DsRed2)基因构建红色荧光蛋白表达载体 | 第41页 |
· 结果与讨论 | 第41-43页 |
· 全基因合成的RFP重组质粒转化大肠杆菌后菌落颜色的特点分析 | 第41-42页 |
· 全基因合成的RFP(DsRed2)重组克隆的序列测定 | 第42-43页 |
· 小结 | 第43-46页 |
第四章 诱导剂对红色荧光蛋白菌落显色的影响 | 第46-49页 |
· 引言 | 第46页 |
· 实验方法及结论 | 第46-47页 |
· 培养基中添加IPTG对红色荧光蛋白菌落显色的影响 | 第46页 |
· 在培养基中添加D-半乳糖对红色荧光蛋白菌落显色的影响 | 第46-47页 |
· 小结 | 第47-49页 |
第五章 红色荧光蛋白的理性设计 | 第49-67页 |
第一节 红色荧光蛋白的7点突变 | 第49-59页 |
· 引言 | 第49页 |
· 实验方法 | 第49-54页 |
· 对最先使用的28aRFP克隆的7点突变 | 第49-52页 |
· 对全基因合成的28aZKRFP克隆的7点突变 | 第52-54页 |
· 结果与讨论 | 第54-57页 |
· 原始RFP基因7点突变PCR电泳图 | 第54-55页 |
· 全基因合成RFP突变PCR电泳图 | 第55-56页 |
· 对两个版本的RFP基因7点突变后的菌落显色结果及分析 | 第56-57页 |
· 小结 | 第57-59页 |
第二节 红色荧光蛋白的3点突变 | 第59-67页 |
· 引言 | 第59页 |
· 实验方法 | 第59-60页 |
· 对原始的RFP和全基因合成的RFP基因的3点突变 | 第59页 |
· 两个版本的RFP基因3点突变后的克隆方案 | 第59-60页 |
· 结果与讨论 | 第60-65页 |
· 原始RFP基因3点突变PCR结果 | 第60-61页 |
· 全基因合成的RFP基因3点突变PCR结果 | 第61页 |
· 两个版本的RFP基因3点突变后的实验结果 | 第61-63页 |
· 30a17cZMCRFP载体转转化后18小时和36小时,在两种固体培养基上的对比实验结果 | 第63-64页 |
· 30a17cZMCRFP载体序列描述 | 第64-65页 |
· 小结 | 第65-67页 |
第六章 结论 | 第67-70页 |
参考文献 | 第70-73页 |
附录一 实验方法 | 第73-75页 |
附录二 试剂 | 第75-78页 |
附录三 仪器设备 | 第78-80页 |
致谢 | 第80-82页 |
作者及导师简介 | 第82-83页 |
附件 | 第83-84页 |