论文目录 | |
中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-10页 |
缩略语 | 第15-17页 |
前言 | 第17-20页 |
研究现状、成果 | 第17-18页 |
研究目的、方法 | 第18-20页 |
实验对象和方法 | 第20-41页 |
1.1 实验试剂 | 第20-24页 |
1.1.1 常用的化学试剂(均为市售分析纯试剂) | 第20页 |
1.1.2 细胞培养相关试剂 | 第20-21页 |
1.1.3 细胞蛋白质提取和蛋白质印迹(Western Blotting)相关试剂 | 第21-22页 |
1.1.4 抗体 | 第22-23页 |
1.1.5 蛋白免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)技术 | 第23页 |
1.1.6 细胞腺病毒(adenovirus)过表达和基因沉默技术 | 第23页 |
1.1.7 其他试剂 | 第23-24页 |
1.2 实验使用主要试剂配制 | 第24-27页 |
1.2.1 DMEM-F12培养基的配制 | 第24页 |
1.2.2 DMEM培养基配制 | 第24页 |
1.2.3 磷酸盐缓冲液(PBS)配制 | 第24-25页 |
1.2.4 细胞消化液配制 | 第25页 |
1.2.5 配制不连续的SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE) | 第25页 |
1.2.6 配制Western Blotting电泳缓冲液 | 第25-26页 |
1.2.7 配制Western Blotting电转缓冲液 | 第26页 |
1.2.8 制备1×TBST缓冲液 | 第26页 |
1.2.9 抗原封闭液配制 | 第26页 |
1.2.10 透膜液的配制 | 第26-27页 |
1.3 实验设备 | 第27-28页 |
1.4 细胞实验部分的实验方法 | 第28-36页 |
1.4.1 人主动脉平滑肌细胞的复苏 | 第28-29页 |
1.4.2 人主动脉平滑肌细胞的传代 | 第29页 |
1.4.3 人主动脉平滑肌细胞的饥饿 | 第29-30页 |
1.4.4 人主动脉平滑肌细胞的冻存 | 第30页 |
1.4.5 siRNA干扰技术 | 第30-31页 |
1.4.6 细胞RNA的提取(使用北京全式金RNA提取试剂盒) | 第31-32页 |
1.4.7 全细胞蛋白质的提取 | 第32页 |
1.4.8 细胞核和细胞浆蛋白的提取(使用购买于美国Thermo公司的提取试剂盒) | 第32-33页 |
1.4.9 蛋白质的定量(使用BCA蛋白质定量试剂盒) | 第33-34页 |
1.4.10 蛋白质免疫共沉淀(CO-IP) | 第34-35页 |
1.4.11 蛋白样品在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中电泳和电转 | 第35页 |
1.4.12 免疫杂交反应 | 第35页 |
1.4.13 印迹膜化学发光 | 第35页 |
1.4.14 蛋白免疫印迹(Western Blotting)条带灰度值计算 | 第35-36页 |
1.4.15 免疫荧光染色(immunofluorescent staining) | 第36页 |
1.5 动物实验部分的实验方法 | 第36-40页 |
1.5.1 鼠尾全基因组DNA的提取 | 第36页 |
1.5.2 鼠尾全基因组DNA的PCR扩增 | 第36-37页 |
1.5.3 弹性蛋白酶诱导腹主动脉瘤小鼠模型的建立 | 第37-38页 |
1.5.4 模型小鼠组织样品的取材 | 第38页 |
1.5.5 小鼠腹主动脉血管的HE染色 | 第38-39页 |
1.5.6 小鼠腹主动脉血管的EVG染色(sigma公司-弹力板染色剂kit染色) | 第39-40页 |
1.6 实验数据的统计和分析的方法 | 第40-41页 |
1.6.1 实验数据的统计 | 第40页 |
1.6.2 实验数据使用的分析方法 | 第40-41页 |
结果 | 第41-54页 |
第一部分 细胞实验结果 | 第41-49页 |
1.1 转化生长因子-β1可以调控潜在转化生长因子结合蛋白4的表达 | 第41-43页 |
1.1.1 给予人血管平滑肌细胞重组蛋白TGF-β1处理 | 第41-42页 |
1.1.2 转化生长因子-β1能够呈时间和剂量依赖性增加LTBP4蛋白水平 | 第42-43页 |
1.2 转化生长因子-β1(TGF-β1)可以调控YAP磷酸化和核定位 | 第43-45页 |
1.2.1 TGF-β1能增加YAP蛋白酪氨酸357位点的磷酸化 | 第43-44页 |
1.2.2 TGF-β1能增加YAP蛋白转位入核 | 第44-45页 |
1.3 YAP在TGF-β1对LTBP4的转录调控过程起关键作用 | 第45-47页 |
1.3.1 人血管平滑肌细胞敲低YAP会阻断TGF-β1对于LTBP4的转录调控 | 第45页 |
1.3.2 在人平滑肌细胞中过表达YAP增强TGF-β1对于LTBP4的表达调控 | 第45-46页 |
1.3.3 在人血管平滑肌细胞中过表达357E-YAP呈剂量依赖性增加LTBP4的表达 | 第46-47页 |
1.4 YAP与TGF-β1下游效应分子p-SMAD2/3结合来调控LTBP4表达 | 第47-49页 |
第二部分 动物实验结果 | 第49-54页 |
2.1 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))小鼠的腹主动脉中LTBP4表达显著缯加 | 第49-51页 |
2.1.1 平滑肌细胞特异性过表达YAP蛋白小鼠模型构建 | 第49页 |
2.1.2 平滑肌细胞特异性过表达YAP小鼠基因型鉴定 | 第49-50页 |
2.1.3 平滑肌细胞特异性过表达YAP (SMC-YAP~(tg))小鼠腹主动脉中LTBP4表达增加 | 第50-51页 |
2.2 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))能改善腹主动脉瘤 | 第51-54页 |
2.2.1 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))鼠与对照(YAP~(-flox))鼠相比腹主动脉瘤的大小明显降低 | 第52-53页 |
2.2.2 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))鼠与对照(YAP~(-flox))鼠相比腹主动脉瘤的弹力板断裂情况明显改善 | 第53-54页 |
讨论 | 第54-58页 |
1.1 平滑肌细胞中TGF-β信号通路的激活可以增加LTBP4的表达 | 第55-56页 |
1.2 TGF-β1促进血管平滑肌细胞中YAP蛋白的357位点的磷酸化和转位入核 | 第56页 |
1.3 YAP在TGF-β1调控LTBP4表达过程中起关键作用 | 第56-57页 |
1.4 平滑肌细胞特异性过表达YAP小鼠能明显改善腹主动脉瘤 | 第57-58页 |
全文结论 | 第58-59页 |
论文创新点 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-66页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第66-67页 |
综述 转化生长因子-β在腹主动脉瘤中的研究进展 | 第67-89页 |
综述参考文献 | 第76-89页 |
致谢 | 第89-90页 |
个人简历 | 第90页 |