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血管平滑肌细胞TGF-β信号通路在腹主动脉瘤中的作用和机制研究

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血管平滑肌细胞TGF-β信号通路在腹主动脉瘤中的作用和机制研究
论文目录
 
中文摘要第1-7页
Abstract第7-10页
缩略语第15-17页
前言第17-20页
    研究现状、成果第17-18页
    研究目的、方法第18-20页
实验对象和方法第20-41页
    1.1 实验试剂第20-24页
        1.1.1 常用的化学试剂(均为市售分析纯试剂)第20页
        1.1.2 细胞培养相关试剂第20-21页
        1.1.3 细胞蛋白质提取和蛋白质印迹(Western Blotting)相关试剂第21-22页
        1.1.4 抗体第22-23页
        1.1.5 蛋白免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)技术第23页
        1.1.6 细胞腺病毒(adenovirus)过表达和基因沉默技术第23页
        1.1.7 其他试剂第23-24页
    1.2 实验使用主要试剂配制第24-27页
        1.2.1 DMEM-F12培养基的配制第24页
        1.2.2 DMEM培养基配制第24页
        1.2.3 磷酸盐缓冲液(PBS)配制第24-25页
        1.2.4 细胞消化液配制第25页
        1.2.5 配制不连续的SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)第25页
        1.2.6 配制Western Blotting电泳缓冲液第25-26页
        1.2.7 配制Western Blotting电转缓冲液第26页
        1.2.8 制备1×TBST缓冲液第26页
        1.2.9 抗原封闭液配制第26页
        1.2.10 透膜液的配制第26-27页
    1.3 实验设备第27-28页
    1.4 细胞实验部分的实验方法第28-36页
        1.4.1 人主动脉平滑肌细胞的复苏第28-29页
        1.4.2 人主动脉平滑肌细胞的传代第29页
        1.4.3 人主动脉平滑肌细胞的饥饿第29-30页
        1.4.4 人主动脉平滑肌细胞的冻存第30页
        1.4.5 siRNA干扰技术第30-31页
        1.4.6 细胞RNA的提取(使用北京全式金RNA提取试剂盒)第31-32页
        1.4.7 全细胞蛋白质的提取第32页
        1.4.8 细胞核和细胞浆蛋白的提取(使用购买于美国Thermo公司的提取试剂盒)第32-33页
        1.4.9 蛋白质的定量(使用BCA蛋白质定量试剂盒)第33-34页
        1.4.10 蛋白质免疫共沉淀(CO-IP)第34-35页
        1.4.11 蛋白样品在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中电泳和电转第35页
        1.4.12 免疫杂交反应第35页
        1.4.13 印迹膜化学发光第35页
        1.4.14 蛋白免疫印迹(Western Blotting)条带灰度值计算第35-36页
        1.4.15 免疫荧光染色(immunofluorescent staining)第36页
    1.5 动物实验部分的实验方法第36-40页
        1.5.1 鼠尾全基因组DNA的提取第36页
        1.5.2 鼠尾全基因组DNA的PCR扩增第36-37页
        1.5.3 弹性蛋白酶诱导腹主动脉瘤小鼠模型的建立第37-38页
        1.5.4 模型小鼠组织样品的取材第38页
        1.5.5 小鼠腹主动脉血管的HE染色第38-39页
        1.5.6 小鼠腹主动脉血管的EVG染色(sigma公司-弹力板染色剂kit染色)第39-40页
    1.6 实验数据的统计和分析的方法第40-41页
        1.6.1 实验数据的统计第40页
        1.6.2 实验数据使用的分析方法第40-41页
结果第41-54页
    第一部分 细胞实验结果第41-49页
        1.1 转化生长因子-β1可以调控潜在转化生长因子结合蛋白4的表达第41-43页
            1.1.1 给予人血管平滑肌细胞重组蛋白TGF-β1处理第41-42页
            1.1.2 转化生长因子-β1能够呈时间和剂量依赖性增加LTBP4蛋白水平第42-43页
        1.2 转化生长因子-β1(TGF-β1)可以调控YAP磷酸化和核定位第43-45页
            1.2.1 TGF-β1能增加YAP蛋白酪氨酸357位点的磷酸化第43-44页
            1.2.2 TGF-β1能增加YAP蛋白转位入核第44-45页
        1.3 YAP在TGF-β1对LTBP4的转录调控过程起关键作用第45-47页
            1.3.1 人血管平滑肌细胞敲低YAP会阻断TGF-β1对于LTBP4的转录调控第45页
            1.3.2 在人平滑肌细胞中过表达YAP增强TGF-β1对于LTBP4的表达调控第45-46页
            1.3.3 在人血管平滑肌细胞中过表达357E-YAP呈剂量依赖性增加LTBP4的表达第46-47页
        1.4 YAP与TGF-β1下游效应分子p-SMAD2/3结合来调控LTBP4表达第47-49页
    第二部分 动物实验结果第49-54页
        2.1 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))小鼠的腹主动脉中LTBP4表达显著缯加第49-51页
            2.1.1 平滑肌细胞特异性过表达YAP蛋白小鼠模型构建第49页
            2.1.2 平滑肌细胞特异性过表达YAP小鼠基因型鉴定第49-50页
            2.1.3 平滑肌细胞特异性过表达YAP (SMC-YAP~(tg))小鼠腹主动脉中LTBP4表达增加第50-51页
        2.2 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))能改善腹主动脉瘤第51-54页
            2.2.1 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))鼠与对照(YAP~(-flox))鼠相比腹主动脉瘤的大小明显降低第52-53页
            2.2.2 平滑肌细胞特异性过表达YAP(SMC-YAP~(tg))鼠与对照(YAP~(-flox))鼠相比腹主动脉瘤的弹力板断裂情况明显改善第53-54页
讨论第54-58页
    1.1 平滑肌细胞中TGF-β信号通路的激活可以增加LTBP4的表达第55-56页
    1.2 TGF-β1促进血管平滑肌细胞中YAP蛋白的357位点的磷酸化和转位入核第56页
    1.3 YAP在TGF-β1调控LTBP4表达过程中起关键作用第56-57页
    1.4 平滑肌细胞特异性过表达YAP小鼠能明显改善腹主动脉瘤第57-58页
全文结论第58-59页
论文创新点第59-60页
参考文献第60-66页
发表论文和参加科研情况说明第66-67页
综述 转化生长因子-β在腹主动脉瘤中的研究进展第67-89页
    综述参考文献第76-89页
致谢第89-90页
个人简历第90页

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