论文目录 | |
| 学位论文数据集 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 固有无序蛋白简介 | 第15页 |
| 1.2 蛋白的液-液相分离 | 第15-18页 |
| 1.2.1 蛋白液-液相分离概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 蛋白液-液相分离的形式 | 第16-17页 |
| 1.2.3 蛋白液-液相分离与疾病的关系 | 第17-18页 |
| 1.3 内在无序蛋白与液-液相分离的关系 | 第18-19页 |
| 1.4 U1-70K蛋白概述 | 第19-20页 |
| 1.5 RBM14蛋白概述 | 第20-21页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-41页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料及试剂 | 第23-27页 |
| 2.2.1 菌株 | 第23页 |
| 2.2.2 质粒 | 第23-24页 |
| 2.2.3 实验试剂及仪器 | 第24-27页 |
| 2.3 重组质粒的构建 | 第27-33页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.3.2 目的片段克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.3 质粒抽提 | 第29-31页 |
| 2.3.4 目的基因片段与载体的双酶切 | 第31-32页 |
| 2.3.5 目的基因片段与载体的连接 | 第32页 |
| 2.3.6 转化 | 第32页 |
| 2.3.7 重组子的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 重组蛋白的表达及纯化 | 第33-38页 |
| 2.4.1 重组蛋白的表达 | 第33-34页 |
| 2.4.2 重组蛋白的纯化 | 第34-36页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE | 第36-37页 |
| 2.4.4 目的蛋白浓缩 | 第37页 |
| 2.4.5 凝胶过滤层析置换缓冲液 | 第37-38页 |
| 2.5 蛋白体外液-液相分离机制的研究 | 第38-39页 |
| 2.5.1 液-液相分离方法 | 第38-39页 |
| 2.5.2 浊度实验 | 第39页 |
| 2.5.3 激光共聚焦显微镜 | 第39页 |
| 2.6 蛋白体外聚集机制的研究 | 第39-41页 |
| 2.6.1 透射电子显微镜观察 | 第39-40页 |
| 2.6.2 THT荧光动力学实验 | 第40页 |
| 2.6.3 1,8-ANS荧光实验 | 第40-41页 |
| 第三章 重组蛋白的分子克隆与表达纯化 | 第41-55页 |
| 3.1 RBM14蛋白PLD中的短片段分子克隆、表达和纯化尝试 | 第41-45页 |
| 3.1.1 His-EGFP-R1 (329-421)的分子克隆、表达和纯化 | 第41-45页 |
| 3.2 His-EGFP-R(284-572)-GST的分子克隆、表达和纯化 | 第45-50页 |
| 3.2.1 HIS-EGFP-R(284-572)-GST的分子克隆 | 第46-48页 |
| 3.2.2 HIS-EGFP-R(284-572)-GST的表达和纯化 | 第48-50页 |
| 3.3 HIS-R(284-572)-GST的分子克隆、表达和纯化 | 第50-53页 |
| 3.3.1 HIS-R (284-572)-GST的分子克隆 | 第50-52页 |
| 3.3.2 HIS-R(284-572)-GST的表达和纯化 | 第52-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 RBM14体外液-液相分离与聚集机制研究 | 第55-65页 |
| 4.1 引言 | 第55-56页 |
| 4.2 EGFP-R (284-572)的体外液-液相分离 | 第56-57页 |
| 4.3 R(284-572)的聚集 | 第57页 |
| 4.4 R(284-572)中多肽片段的聚集 | 第57-63页 |
| 4.4.1 P16的聚集 | 第58-60页 |
| 4.4.2 P28的聚集 | 第60-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第五章 U1-70K体外液-液相分离机制研究 | 第65-73页 |
| 5.1 引言 | 第65-66页 |
| 5.2 EGFP-LC1/LC2体外液-液相分离 | 第66-68页 |
| 5.3 PH值变化对于液-液相分离的影响 | 第68-69页 |
| 5.4 游离氨基酸对于液-液相分离的影响 | 第69-71页 |
| 5.5 多肽及其突变体的液-液相分离 | 第71-72页 |
| 5.6 本章小结 | 第72-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 主要结论 | 第73页 |
| 6.2 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 科研成果及发表的学术论文 | 第83-85页 |
| 作者及导师介绍 | 第85-86页 |
| 附件 | 第86-87页 |
