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生物催化合成6,7-双甲氧四氢异喹啉类生物碱的研究

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生物催化合成6,7-双甲氧四氢异喹啉类生物碱的研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-8页
第一章 前言第9-34页
    1.1 手性胺简介第9-11页
    1.2 手性胺合成第11-16页
        1.2.1 化学不对称合成第11-12页
        1.2.2 酶不对称合成第12-13页
        1.2.3 金属催化不对称合成第13-15页
        1.2.4 酶动力学拆分第15-16页
    1.3 四氢异喹啉类生物碱第16-24页
        1.3.1 四氢异喹啉类生物碱的简介第16-18页
        1.3.2 四氢异喹啉衍生物的合成第18-20页
        1.3.3 光学纯的四氢异喹啉类化合物的制备第20-24页
        1.3.4 目标化合物的设计第24页
    1.4 亚胺还原酶的研究进展第24-32页
        1.4.1 亚胺还原酶的发现第24-27页
        1.4.2 亚胺还原酶的结构和催化机理第27-30页
        1.4.3 亚胺还原酶的拓展应用第30-32页
    1.5 亚胺还原酶的酶工程改造第32页
    1.6 本课题的研究目的及意义第32-34页
第二章 实验材料和方法第34-48页
    2.1 实验材料第34-40页
        2.1.1 菌株第34页
        2.1.2 质粒第34-35页
        2.1.3 引物及其序列第35-36页
        2.1.4 培养基及缓冲液第36-38页
        2.1.5 生化试剂及测序第38-39页
        2.1.6 实验仪器及设备第39-40页
    2.2 实验方法第40-48页
        2.2.1 质粒DNA制备第40页
        2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第40页
        2.2.3 滚环PCR扩增条件及程序第40-41页
        2.2.4 蛋白的表达和纯化第41-42页
        2.2.5 定点饱和突变第42页
        2.2.6 生物催化反应第42页
        2.2.7 外消旋体的制备和分析方法第42-44页
        2.2.8 化合物的合成第44-46页
        2.2.9 酶活力测定第46页
        2.2.10 动力学常数测定第46-47页
        2.2.11 全细胞催化第47-48页
第三章 亚胺还原酶不对称催化合成四氢异喹啉第48-53页
    3.1 已知亚胺还原酶现状第48页
    3.2 大位阻耐受的亚胺还原酶库建立第48-51页
        3.2.1 大位阻耐受的亚胺还原酶的挖掘第48-50页
        3.2.2 大位阻耐受的亚胺还原酶基因合成第50页
        3.2.3 大位阻耐受的亚胺还原酶筛选第50-51页
    3.3 二氢异喹啉底物及还原标品的合成第51-52页
    3.4 本章小结第52-53页
第四章 大位阻耐受的亚胺还原酶的酶工程改造第53-62页
    4.1 设计思路及策略第53页
    4.2 亚胺还原酶结构分析及改造第53-58页
        4.2.1 同源建模与分子对接分析第53-55页
        4.2.2 活性位点氨基酸定点饱和突变第55-58页
    4.3 改造结果分析第58-61页
        4.3.1 突变体和野生株的反应结果比较第58-60页
        4.3.2 突变体和野生株的酶活比较第60页
        4.3.3 突变体和野生株的动力学数据比较第60-61页
    4.4 本章小结第61-62页
第五章 总结与展望第62-64页
附录Ⅰ 手性分析HPLC谱图第64-72页
附录Ⅱ 动力学拟合曲线图第72-78页
附录Ⅲ 核磁谱图第78-83页
参考文献第83-88页
致谢第88页

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