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体外多酶反应指导大肠杆菌莽草酸途径优化提高苯丙氨酸产量

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体外多酶反应指导大肠杆菌莽草酸途径优化提高苯丙氨酸产量
论文目录
 
摘要第1-4页
ABSTRACT第4-8页
第1章 前言第8-20页
  1.1 研究背景第8-9页
  1.2 苯丙氨酸研究现状第9-15页
    1.2.1 苯丙氨酸概述第9页
    1.2.2 L-Phe的功能第9-10页
    1.2.3 L-Phe生产方法第10-15页
  1.3 代谢途径关键酶研究现状第15-17页
  1.4 体外多酶催化的优势及应用第17-18页
  1.5 本文的研究内容及技术路线第18-20页
第2章 材料与方法第20-36页
  2.1 实验材料第20-25页
    2.1.1 菌株、质粒及引物第20-22页
    2.1.2 培养基第22页
    2.1.3 主要试剂第22-23页
    2.1.4 主要溶液第23-24页
    2.1.5 主要仪器第24-25页
  2.2 实验方法第25-34页
    2.2.1 质粒构建第25-27页
    2.2.2 途径蛋白的表达、分离纯化第27-29页
    2.2.3 蛋白质组学分析第29-30页
    2.2.4 蛋白活性测定第30-32页
    2.2.5 动力学参数的测定第32-33页
    2.2.6 菌株粗酶的绝对定量第33-34页
    2.2.7 途径关键酶的确定第34页
    2.2.8 体内验证关键酶第34页
  2.3 L-Phe生产菌株上罐发酵第34-36页
第3章 结果与分析第36-54页
  3.1 微生物发酵第36-37页
    3.1.1 出发菌株HD-1上罐发酵第36页
    3.1.2 小结第36-37页
  3.2 途径蛋白的表达、纯化及蛋白浓度的绝对定量第37-39页
    3.2.1 PCR扩增目的基因的电泳分析第37页
    3.2.2 目的基因的SDS-PAGE图谱第37-38页
    3.2.3 途径蛋白浓度测定第38-39页
    3.2.4 小结第39页
  3.3 蛋白活性测定第39-43页
    3.3.1 标准曲线第39-40页
    3.3.2 途径蛋白活性测定第40-43页
    3.3.3 小结第43页
  3.4 动力学参数的测定第43-45页
    3.4.1 比酶活第43-45页
    3.4.2 小结第45页
  3.5 途径关键酶的确定第45-49页
    3.5.1 确定底物莽草酸添加量第45-46页
    3.5.2 确定体外反应体系第46-47页
    3.5.3 L-Phe标准曲线第47-48页
    3.5.4 L-Phe生成量的测定第48页
    3.5.5 小结第48-49页
  3.6 体内关键酶验证第49-52页
    3.6.1 过表达莽草酸激酶(AroL)及5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(AroA)载体构建第49-50页
    3.6.2 过表达重组菌产L-Phe摇瓶发酵结果第50-51页
    3.6.3 菌株HD-L/1/2/3中AroL活性验证第51页
    3.6.4 小结第51-52页
  3.7 5微生物发酵第52-54页
    3.7.1 工程菌株HD-A2上罐发酵第52页
    3.7.2 小结第52-54页
第4章 结论第54-55页
第5章 展望第55-56页
致谢第56-57页
参考文献第57-63页
攻读学位期间的研究成果第63页

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