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钝齿棒杆菌发酵产精氨酸分子育种研究

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钝齿棒杆菌发酵产精氨酸分子育种研究
论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-6页
中英缩略语索引第6-10页
引言第10-11页
1 L-精氨酸产生菌分子育种研究进展第11-19页
  1.1 L-精氨酸及其产生菌选育策略研究进展第11-14页
    1.1.1 L-精氨酸理化性质第11页
    1.1.2 L-精氨酸的用途及其生产现状第11页
    1.1.3 L-精氨酸产生菌代谢工程改造策略第11-14页
  1.2 基因组尺度网络代谢模型第14-16页
    1.2.1 基因组尺度代谢网络模型的构建第14-15页
    1.2.2 基因组尺度网络模型在分子育种中的应用第15-16页
    1.2.3 基因组尺度代谢网络模型的应用实例第16页
  1.3 本论文研究目的及意义第16-17页
  1.4 本论文研究思路及内容第17-19页
2 钝齿棒杆菌L-精氨酸合成竞争支路敲除及其对产L-精氨酸的影响第19-37页
前言第19-21页
  2.1 实验材料与试剂第21-22页
    2.1.1 菌株和质粒第21页
    2.1.2 酶、试剂和实验仪器第21页
    2.1.3 培养基第21-22页
    2.1.4 试剂配制方法第22页
  2.2 实验方法第22-29页
    2.2.1 引物设计及合成第22-23页
    2.2.2 感受态细胞制备及转化过程第23-24页
    2.2.3 质粒DNA提取方法第24-25页
    2.2.4 DNA回收及纯化方法第25页
    2.2.5 钝齿棒杆菌proC和proB基因打靶载体的构建方法第25-26页
    2.2.6 同源重组过程和单、双交换重组子筛选方法第26-27页
    2.2.7 钝齿棒杆菌产L-精氨酸摇瓶发酵实验第27-28页
    2.2.8 菌体生长量的测定第28页
    2.2.9 L-精氨酸浓度的测定第28页
    2.2.10 发酵液残糖浓度的测定第28-29页
  2.3 实验结果第29-35页
    2.3.1 钝齿棒杆菌proB基因和proC基因敲除载体的构建第29-31页
    2.3.2 钝齿棒杆菌proB基因敲除株和proC基因敲除株的构建第31-32页
    2.3.3 钝齿棒杆菌proB基因缺失株摇瓶发酵实验第32-33页
    2.3.4 添加脯氨酸对proB基因缺失株摇瓶发酵实验第33-34页
    2.3.5 钝齿棒杆菌proC基因缺失株摇瓶发酵实验第34-35页
  2.4 讨论第35-37页
3 钝齿棒杆菌乙酸合成途径与支链氨基酸转运蛋白的敲除及其对产L-精氨酸的影响第37-49页
前言第37-39页
  3.1 实验材料与试剂第39-40页
    3.1.1 菌株和质粒第39-40页
    3.1.2 酶、试剂和实验仪器第40页
    3.1.3 培养基第40页
    3.1.4 试剂配制方法第40页
  3.2 实验方法第40-41页
    3.2.1 引物设计及合成第40-41页
    3.2.2 感受态细胞制备及转化过程第41页
    3.2.3 DNA回收及纯化第41页
    3.2.4 质粒DNA提取方法第41页
    3.2.5 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因打靶载体构建第41页
    3.2.6 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因缺失株的筛选第41页
    3.2.7 钝齿棒杆菌产L-精氨酸摇瓶发酵实验第41页
    3.2.8 菌体生长量的测定第41页
    3.2.9 L-精氨酸浓度的测定第41页
    3.2.10 发酵液残糖浓度的测定第41页
  3.3 实验结果第41-47页
    3.3.1 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因打靶载体构建第41-43页
    3.3.2 钝齿棒杆菌pta、ack和cgl2310基因缺失株的构建第43-45页
    3.3.3 钝齿棒杆菌pta和ack基因敲除株的发酵实验第45-47页
    3.3.4 钝齿棒杆菌cgl2310基因缺失株的发酵实验第47页
  3.4 讨论第47-49页
4 钝齿棒杆菌proB、pta、cgl2310基因组合敲除及其对产L-精氨酸的影响第49-54页
前言第49-50页
  4.1 实验材料与试剂第50页
    4.1.1 菌株和质粒第50页
    4.1.2 酶、试剂和实验仪器第50页
    4.1.3 培养基第50页
    4.1.4 试剂配制方法第50页
  4.2 实验方法第50-51页
    4.2.1 质粒DNA提取方法第50-51页
    4.2.2 感受态细胞制备及转化过程第51页
    4.2.3 同源重组和单、双交换重组子筛选方法第51页
    4.2.4 钝齿棒杆菌突变菌株L-精氨酸摇瓶发酵实验第51页
    4.2.5 L-精氨酸测定方法第51页
    4.2.6 菌体生长量测定方法第51页
    4.2.7 发酵液残糖量测定方法第51页
  4.3 实验结果第51-53页
    4.3.1 C. crenatum MT argB M4 ΔproB Δcgl2310的构建第51-52页
    4.3.2 C. crenatum MT argB M4 ΔproB Δcgl2310 Δpta的构建第52页
    4.3.3 钝齿棒杆菌突变菌株发酵实验第52-53页
  4.4 讨论第53-54页
5 结论和展望第54-56页
  5.1 主要结论第54-55页
  5.2 课题展望第55-56页
参考文献第56-59页
附录第59-64页
附录 A1实验仪器第59-60页
附录 A2试剂第60-61页
附录 A3基因敲除模拟预测第61-64页
致谢第64-65页
在读期间公开发表论文(著)及科研情况第65页

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