论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 副溶血弧菌研究概况 | 第10-17页 |
| 1.1 副溶血弧菌的发现历程 | 第10页 |
| 1.2 副溶血弧菌的生物学特性及危害 | 第10-11页 |
| 1.3 副溶血弧菌主要毒力因子 | 第11-14页 |
| 1.3.1 溶血素 | 第11-12页 |
| 1.3.2 Ⅲ型分泌系统 | 第12-13页 |
| 1.3.3 荚膜多糖 | 第13-14页 |
| 1.4 副溶血弧菌的毒力基因表达调控 | 第14-15页 |
| 1.4.1 T3SS调节 | 第14页 |
| 1.4.2 AphA调节 | 第14-15页 |
| 1.4.3 toxR、toxS调节 | 第15页 |
| 1.5 二硫键氧化还原蛋白 | 第15-16页 |
| 1.6 DsbA氧化还原电位 | 第16-17页 |
| 第二章 VpDsbA蛋白表达纯化以及多克隆抗体的制备 | 第17-33页 |
| 2.1 仪器与材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 试验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第18页 |
| 2.1.3 试剂及溶液配制 | 第18-19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 原核表达重组质粒的构建 | 第19-26页 |
| 2.2.2 少量诱导VpDsbA蛋白表达 | 第26页 |
| 2.2.3 VpDsbA蛋白纯化与透析 | 第26-27页 |
| 2.2.4 VpDsbA多克隆抗体的制备 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.3.1 重组表达载体的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第29页 |
| 2.3.3 重组蛋白多克隆抗体的特异性检测 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-33页 |
| 第三章 VpDsbA蛋白还原酶活性与氧还电位测定 | 第33-39页 |
| 3.1 仪器与材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 试验仪器 | 第33页 |
| 3.1.2 试剂及溶液配制 | 第33-34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 VpDsbA蛋白二硫键还原酶活性测定试验 | 第34页 |
| 3.2.2 VpDsbA蛋白氧还电位的测定 | 第34-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-37页 |
| 3.3.1 VpDsbA蛋白还原酶活性测定 | 第36-37页 |
| 3.3.2 VpDsbA蛋白氧还电位的测定 | 第37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 VpDsbA色氨酸突变体蛋白表达纯化以及还原酶活性与氧还电位的测定 | 第39-53页 |
| 4.1 仪器与材料 | 第39页 |
| 4.1.1 试验仪器 | 第39页 |
| 4.1.2 菌株与质粒 | 第39页 |
| 4.1.3 试剂及溶液配制 | 第39页 |
| 4.2 试验方法 | 第39-48页 |
| 4.2.1 VpdsbA1~(F92W)和VpdsbA2~(Y92W)色氨酸突变体原核表达重组载体的构建 | 第40-44页 |
| 4.2.2 VpdsbA1~(Y143W)和VpdsbA2~(Y143W)色氨酸突变体原核表达重组载体的构建 | 第44-46页 |
| 4.2.3 VpDsbA色氨酸突变体蛋白二硫键还原酶活性测定 | 第46-47页 |
| 4.2.4 VpDsbA色氨酸突变体氧还电位测定 | 第47-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.3.1 VpdsbA色氨酸突变体的构建与鉴定 | 第48-50页 |
| 4.3.2 VpDsbA色氨酸突变体蛋白的表达与纯化 | 第50页 |
| 4.3.3 VpDsbA色氨酸突变体蛋白还原酶活性测定 | 第50-51页 |
| 4.3.4 VpDsbA色氨酸突变体蛋白氧还电位的测定 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 VpdsbA基因缺失株与回补株的构建及表型分析 | 第53-66页 |
| 5.1 仪器与材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 试验仪器 | 第53页 |
| 5.1.2 菌株与质粒 | 第53页 |
| 5.1.3 试剂及溶液配制 | 第53-54页 |
| 5.2 试验方法 | 第54-59页 |
| 5.2.1 VpdsbA缺失株重组载体的构建 | 第54-57页 |
| 5.2.2 将重组质粒从大肠杆菌E.coli DH5α λ pir转移至副溶血弧菌 | 第57页 |
| 5.2.3 同源重组筛选VpdsbA缺失株 | 第57-58页 |
| 5.2.4 回补株重组表达载体的构建 | 第58页 |
| 5.2.5 生长曲线的测定 | 第58页 |
| 5.2.6 氯化镉试验 | 第58-59页 |
| 5.2.7 神奈川试验 | 第59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-65页 |
| 5.3.1 VpdsbA缺失重组载体的构建与鉴定以及缺失株的筛选 | 第59-62页 |
| 5.3.2 VpdsbA回补重组载体的构建与鉴定 | 第62-63页 |
| 5.3.3 VpdsbA缺失株与回补株生长曲线分析 | 第63页 |
| 5.3.4 氯化镉试验分析 | 第63-64页 |
| 5.3.5 神奈川试验产生 β-溶血环结果分析 | 第64-65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-66页 |
| 全文总结 | 第66-67页 |
| 缩略词 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 个人简介 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
