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拟穴青蟹谷氨酰胺酰肽环转移酶基因的先天性免疫功能研究

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拟穴青蟹谷氨酰胺酰肽环转移酶基因的先天性免疫功能研究
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-12页
前言第12-24页
1 拟穴青蟹Glutaminyl-peptide cyclotransferase基因全长序列的克隆第24-39页
  1.1 试验材料与仪器第24-25页
    1.1.1 试验动物第24页
    1.1.2 试验试剂第24页
    1.1.3 试验仪器与设备第24-25页
  1.2 试验方法第25-32页
    1.2.1 样品采集第25页
    1.2.2 血淋巴总RNA提取第25-26页
    1.2.3 cDNA末端快速扩增(RACE)第26-32页
      1.2.3.1 引物设计第26-27页
      1.2.3.2 SMARTer RACE 5’/3’ Kit合成第一链cDNA第27-28页
      1.2.3.3 PCR与巢氏PCR进行序列扩增第28-29页
      1.2.3.4 DNA凝胶回收第29-30页
      1.2.3.5 QPCT基因片段克隆载体的连接与转化第30-31页
      1.2.3.6 菌液PCR与测序第31页
      1.2.3.7 测序结果分析第31-32页
  1.3 试验结果分析第32-38页
    1.3.1 全长序列拼接与分析第32-34页
    1.3.2 保守性分析第34-36页
    1.3.3 进化树构建第36-38页
  1.4 讨论第38页
  1.5 小结第38-39页
2 拟穴青蟹QPCT基因敲低及免疫功能探究第39-56页
  2.1 试验材料与仪器第39-40页
    2.1.1 试验动物与毒种第39页
    2.1.2 试验试剂第39-40页
    2.1.3 试验仪器与设备第40页
  2.2 试验方法第40-49页
    2.2.1 组织表达量检测第40-43页
      2.2.1.1 拟穴青蟹组织总RNA提取第40-41页
      2.2.1.2 cDNA合成第41-42页
      2.2.1.3 实时荧光定量检测第42-43页
      2.2.1.4 结果分析第43页
    2.2.2 dsRNA质粒构建第43-44页
      2.2.2.1 HT115感受态细胞的制备第43页
      2.2.2.2 引物设计第43-44页
      2.2.2.3 融合表达载体第44页
    2.2.3 QPCT-dsRNA的诱导表达第44-45页
      2.2.3.2 dsRNA退火第44页
      2.2.3.3 dsRNA纯化第44-45页
      2.2.3.4 dsRNA纯度检测第45页
    2.2.4 QPCT-dsRNA干扰效果检测第45-46页
      2.2.4.2 RNA提取第45页
      2.2.4.3 cDNA合成第45-46页
      2.2.4.4 实时荧光定量检测第46页
    2.2.5 免疫基因检测第46-47页
      2.2.5.2 引物设计第46-47页
      2.2.5.3 dsRNA注射处理第47页
      2.2.5.4 RNA提取第47页
      2.2.5.5 cDNA合成第47页
      2.2.5.6 实时荧光定量检测第47页
    2.2.6 免疫活性检测第47-48页
      2.2.6.2 dsRNA注射处理第48页
      2.2.6.3 血细胞总数(THC)检测第48页
      2.2.6.4 PO活性第48页
      2.2.6.5 SOD活性第48页
    2.2.7 数据统计第48-49页
  2.3 试验结果第49-54页
    2.3.1 QPCT组织表达差异性分析第49页
    2.3.2 dsRNA体外试验干扰QPCT表达第49-52页
      2.3.2.1 QPCT-dsRNA质粒构建第49-50页
      2.3.2.2 dsRNA纯度检测第50页
      2.3.2.3 QPCT-dsRNA干扰效果检测第50-51页
      2.3.2.4 干扰时效检测第51-52页
    2.3.3 重要相关免疫基因的表达量检测第52页
    2.3.4 免疫活性检测第52-54页
      2.3.4.1 血细胞总数(THC)检测第52-53页
      2.3.4.2 酚氧化酶(PO)活性第53页
      2.3.4.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性第53-54页
  2.4 讨论第54-55页
  2.5 小结第55-56页
3 拟穴青蟹QPCT基因抗菌活性的探究第56-66页
  3.1 试验材料与仪器第56页
    3.1.1 试验动物与毒种第56页
    3.1.2 试验试剂第56页
    3.1.3 试验仪器与设备第56页
  3.2 试验方法第56-60页
    3.2.1 病原诱导表达变化分析第56页
      3.2.1.1 拟穴青蟹攻毒处理第56页
      3.2.1.2 RNA提取第56页
      3.2.1.3 cDNA合成第56页
      3.2.1.4 实时荧光定量检测第56页
      3.2.1.5 结果分析第56页
    3.2.2 Kaplan–Meier生存分析试验第56-57页
      3.2.2.1 dsRNA及攻毒处理第57页
      3.2.2.2 分组设计第57页
      3.2.2.3 数据统计第57页
    3.2.3 吞噬试验第57-59页
      3.2.3.1 FITC标记V. alginolyticus第57-58页
      3.2.3.2 拟穴青蟹血淋巴细胞培养第58页
      3.2.3.3 吞噬与制片第58-59页
      3.2.3.4 流式细胞术计算吞噬百分率第59页
    3.2.4 THC检测第59页
    3.2.5 血细胞凋亡第59-60页
    3.2.6 数据统计第60页
  3.3 试验结果第60-65页
    3.3.1 病原诱导QPCT表达变化分析第60页
    3.3.2 Kaplan–Meier生存分析试验第60-61页
    3.3.3 QPCT对细胞吞噬作用的影响第61-63页
      3.3.3.1 QPCT对细胞吞噬的影响第61-62页
      3.3.3.2 QPCT对细胞骨架蛋白的影响第62-63页
    3.3.4 THC检测第63-64页
    3.3.5 QPCT对细胞凋亡的影响第64-65页
  3.4 讨论第65页
  3.5 小结第65-66页
4 拟穴青蟹QPCT基因促进病毒复制的研究第66-80页
  4.1 试验材料与仪器第66页
    4.1.1 试验动物与毒种第66页
    4.1.2 试验试剂第66页
    4.1.3 试验仪器与设备第66页
  4.2 试验方法第66-72页
    4.2.1 病原诱导QPCT表达变化分析第66-67页
      4.2.1.1 实验材料处理第66页
      4.2.1.2 RNA提取第66页
      4.2.1.3 cDNA合成第66页
      4.2.1.4 实时荧光定量检测第66页
      4.2.1.5 结果分析第66-67页
    4.2.2 WSSV提取与纯化第67页
    4.2.3 病毒拷贝数检测第67-69页
      4.2.3.1 dsRNA注射处理第67页
      4.2.3.2 基因组DNA提取第67-68页
      4.2.3.3 检测体系与程序第68-69页
      4.2.3.4 数据分析第69页
    4.2.4 THC检测第69页
    4.2.5 Kaplan–Meier生存分析试验第69-70页
      4.2.5.1 分组设计第69页
      4.2.5.2 数据统计第69-70页
    4.2.6 细胞吞噬试验第70-71页
      4.2.6.1 WSSV病毒灭活第70页
      4.2.6.2 FITC标记病毒第70页
      4.2.6.3 拟穴青蟹血淋巴细胞培养第70页
      4.2.6.4 吞噬与制片第70-71页
      4.2.6.5 流式细胞术计算吞噬百分率第71页
    4.2.7 血细胞凋亡第71页
    4.2.8 数据统计第71-72页
  4.3 试验结果第72-78页
    4.3.1 病原诱导表达变化分析第72页
    4.3.2 THC检测第72-73页
    4.3.3 WSSV提取第73-74页
    4.3.4 WSSV拷贝数检测第74页
    4.3.5 Kaplan–Meier生存分析试验第74-75页
    4.3.6 QPCT对细胞吞噬作用的影响第75-77页
      4.3.6.1 QPCT对细胞吞噬的影响第75-76页
      4.3.6.2 QPCT对细胞骨架蛋白的影响第76-77页
    4.3.7 QPCT对细胞凋亡的影响第77-78页
  4.4 讨论第78-79页
  4.5 小结第79-80页
  5. 全文总结第80-81页
参考文献第81-86页
个人简介第86-87页
致谢第87页

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