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拟穴青蟹谷氨酰胺酰肽环转移酶基因的先天性免疫功能研究
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拟穴青蟹谷氨酰胺酰肽环转移酶基因的先天性免疫功能研究
论文目录
摘要
第1-6页
ABSTRACT
第6-12页
前言
第12-24页
1 拟穴青蟹Glutaminyl-peptide cyclotransferase基因全长序列的克隆
第24-39页
1.1 试验材料与仪器
第24-25页
1.1.1 试验动物
第24页
1.1.2 试验试剂
第24页
1.1.3 试验仪器与设备
第24-25页
1.2 试验方法
第25-32页
1.2.1 样品采集
第25页
1.2.2 血淋巴总RNA提取
第25-26页
1.2.3 cDNA末端快速扩增(RACE)
第26-32页
1.2.3.1 引物设计
第26-27页
1.2.3.2 SMARTer RACE 5’/3’ Kit合成第一链cDNA
第27-28页
1.2.3.3 PCR与巢氏PCR进行序列扩增
第28-29页
1.2.3.4 DNA凝胶回收
第29-30页
1.2.3.5 QPCT基因片段克隆载体的连接与转化
第30-31页
1.2.3.6 菌液PCR与测序
第31页
1.2.3.7 测序结果分析
第31-32页
1.3 试验结果分析
第32-38页
1.3.1 全长序列拼接与分析
第32-34页
1.3.2 保守性分析
第34-36页
1.3.3 进化树构建
第36-38页
1.4 讨论
第38页
1.5 小结
第38-39页
2 拟穴青蟹QPCT基因敲低及免疫功能探究
第39-56页
2.1 试验材料与仪器
第39-40页
2.1.1 试验动物与毒种
第39页
2.1.2 试验试剂
第39-40页
2.1.3 试验仪器与设备
第40页
2.2 试验方法
第40-49页
2.2.1 组织表达量检测
第40-43页
2.2.1.1 拟穴青蟹组织总RNA提取
第40-41页
2.2.1.2 cDNA合成
第41-42页
2.2.1.3 实时荧光定量检测
第42-43页
2.2.1.4 结果分析
第43页
2.2.2 dsRNA质粒构建
第43-44页
2.2.2.1 HT115感受态细胞的制备
第43页
2.2.2.2 引物设计
第43-44页
2.2.2.3 融合表达载体
第44页
2.2.3 QPCT-dsRNA的诱导表达
第44-45页
2.2.3.2 dsRNA退火
第44页
2.2.3.3 dsRNA纯化
第44-45页
2.2.3.4 dsRNA纯度检测
第45页
2.2.4 QPCT-dsRNA干扰效果检测
第45-46页
2.2.4.2 RNA提取
第45页
2.2.4.3 cDNA合成
第45-46页
2.2.4.4 实时荧光定量检测
第46页
2.2.5 免疫基因检测
第46-47页
2.2.5.2 引物设计
第46-47页
2.2.5.3 dsRNA注射处理
第47页
2.2.5.4 RNA提取
第47页
2.2.5.5 cDNA合成
第47页
2.2.5.6 实时荧光定量检测
第47页
2.2.6 免疫活性检测
第47-48页
2.2.6.2 dsRNA注射处理
第48页
2.2.6.3 血细胞总数(THC)检测
第48页
2.2.6.4 PO活性
第48页
2.2.6.5 SOD活性
第48页
2.2.7 数据统计
第48-49页
2.3 试验结果
第49-54页
2.3.1 QPCT组织表达差异性分析
第49页
2.3.2 dsRNA体外试验干扰QPCT表达
第49-52页
2.3.2.1 QPCT-dsRNA质粒构建
第49-50页
2.3.2.2 dsRNA纯度检测
第50页
2.3.2.3 QPCT-dsRNA干扰效果检测
第50-51页
2.3.2.4 干扰时效检测
第51-52页
2.3.3 重要相关免疫基因的表达量检测
第52页
2.3.4 免疫活性检测
第52-54页
2.3.4.1 血细胞总数(THC)检测
第52-53页
2.3.4.2 酚氧化酶(PO)活性
第53页
2.3.4.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性
第53-54页
2.4 讨论
第54-55页
2.5 小结
第55-56页
3 拟穴青蟹QPCT基因抗菌活性的探究
第56-66页
3.1 试验材料与仪器
第56页
3.1.1 试验动物与毒种
第56页
3.1.2 试验试剂
第56页
3.1.3 试验仪器与设备
第56页
3.2 试验方法
第56-60页
3.2.1 病原诱导表达变化分析
第56页
3.2.1.1 拟穴青蟹攻毒处理
第56页
3.2.1.2 RNA提取
第56页
3.2.1.3 cDNA合成
第56页
3.2.1.4 实时荧光定量检测
第56页
3.2.1.5 结果分析
第56页
3.2.2 Kaplan–Meier生存分析试验
第56-57页
3.2.2.1 dsRNA及攻毒处理
第57页
3.2.2.2 分组设计
第57页
3.2.2.3 数据统计
第57页
3.2.3 吞噬试验
第57-59页
3.2.3.1 FITC标记V. alginolyticus
第57-58页
3.2.3.2 拟穴青蟹血淋巴细胞培养
第58页
3.2.3.3 吞噬与制片
第58-59页
3.2.3.4 流式细胞术计算吞噬百分率
第59页
3.2.4 THC检测
第59页
3.2.5 血细胞凋亡
第59-60页
3.2.6 数据统计
第60页
3.3 试验结果
第60-65页
3.3.1 病原诱导QPCT表达变化分析
第60页
3.3.2 Kaplan–Meier生存分析试验
第60-61页
3.3.3 QPCT对细胞吞噬作用的影响
第61-63页
3.3.3.1 QPCT对细胞吞噬的影响
第61-62页
3.3.3.2 QPCT对细胞骨架蛋白的影响
第62-63页
3.3.4 THC检测
第63-64页
3.3.5 QPCT对细胞凋亡的影响
第64-65页
3.4 讨论
第65页
3.5 小结
第65-66页
4 拟穴青蟹QPCT基因促进病毒复制的研究
第66-80页
4.1 试验材料与仪器
第66页
4.1.1 试验动物与毒种
第66页
4.1.2 试验试剂
第66页
4.1.3 试验仪器与设备
第66页
4.2 试验方法
第66-72页
4.2.1 病原诱导QPCT表达变化分析
第66-67页
4.2.1.1 实验材料处理
第66页
4.2.1.2 RNA提取
第66页
4.2.1.3 cDNA合成
第66页
4.2.1.4 实时荧光定量检测
第66页
4.2.1.5 结果分析
第66-67页
4.2.2 WSSV提取与纯化
第67页
4.2.3 病毒拷贝数检测
第67-69页
4.2.3.1 dsRNA注射处理
第67页
4.2.3.2 基因组DNA提取
第67-68页
4.2.3.3 检测体系与程序
第68-69页
4.2.3.4 数据分析
第69页
4.2.4 THC检测
第69页
4.2.5 Kaplan–Meier生存分析试验
第69-70页
4.2.5.1 分组设计
第69页
4.2.5.2 数据统计
第69-70页
4.2.6 细胞吞噬试验
第70-71页
4.2.6.1 WSSV病毒灭活
第70页
4.2.6.2 FITC标记病毒
第70页
4.2.6.3 拟穴青蟹血淋巴细胞培养
第70页
4.2.6.4 吞噬与制片
第70-71页
4.2.6.5 流式细胞术计算吞噬百分率
第71页
4.2.7 血细胞凋亡
第71页
4.2.8 数据统计
第71-72页
4.3 试验结果
第72-78页
4.3.1 病原诱导表达变化分析
第72页
4.3.2 THC检测
第72-73页
4.3.3 WSSV提取
第73-74页
4.3.4 WSSV拷贝数检测
第74页
4.3.5 Kaplan–Meier生存分析试验
第74-75页
4.3.6 QPCT对细胞吞噬作用的影响
第75-77页
4.3.6.1 QPCT对细胞吞噬的影响
第75-76页
4.3.6.2 QPCT对细胞骨架蛋白的影响
第76-77页
4.3.7 QPCT对细胞凋亡的影响
第77-78页
4.4 讨论
第78-79页
4.5 小结
第79-80页
5. 全文总结
第80-81页
参考文献
第81-86页
个人简介
第86-87页
致谢
第87页
本篇论文共
87
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