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青蛤(Cyclina sinensis)Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达与其重组蛋白活性分析

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青蛤(Cyclina sinensis)Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达与其重组蛋白活性分析
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-14页
第一章 文献综述第14-22页
  1.1 青蛤的经济价值及相关研究背景第14-15页
  1.2 青蛤大规模死亡原因第15-16页
  1.3 鳗弧菌的治病机理和防治第16-17页
    1.3.1 鳗弧菌的致病机理第16-17页
    1.3.2 防治策略第17页
  1.4 贝类的免疫方式与过程第17-19页
    1.4.1 细胞免疫第17-18页
    1.4.2 体液免疫第18-19页
  1.5 丝氨酸蛋白酶抑制剂概述第19-20页
  1.6 研究目的、意义及创新点第20-22页
    1.6.1 研究目的第20-21页
    1.6.2 研究意义第21页
    1.6.3 研究创新点第21-22页
第二章 青蛤SPI基因序列的克隆和结构分析第22-32页
  2.1 材料与方法第22-23页
    2.1.1 实验材料第22页
    2.1.2 主要仪器第22-23页
    2.1.3 主要试剂第23页
  2.2 实验方法第23-24页
    2.2.1 青蛤cDNA文库的构建第23-24页
    2.2.2 青蛤SPI基因筛选及生物信息学分析第24页
  2.3 结果第24-30页
    2.3.1 青蛤SPI基因的结构特征第24-26页
    2.3.2 同源性分析第26-27页
    2.3.3 青蛤Kazal型SPI空间结构预测第27-28页
    2.3.4 青蛤Kazal型SPI基因系统学分析第28-30页
  2.4 讨论第30-32页
第三章 青蛤SPI基因的表达分析第32-45页
  3.1 实验材料第32-34页
    3.1.1 实验动物第32页
    3.1.2 实验药品与试剂第32-33页
    3.1.3 主要仪器第33页
    3.1.4 药品配置第33-34页
    3.1.5 引物设计与合成第34页
  3.2 实验方法第34-40页
    3.2.1 青蛤SPI基因在组织间的表达第34-38页
      3.2.1.1 样品处理第34-35页
      3.2.1.2 青蛤总RNA的提取第35-36页
      3.2.1.3 cDNA模板第一链的合成第36-37页
      3.2.1.4 RT-PCR检测SPI基因在不同组织中的表达情况第37-38页
      3.2.1.5 数据分析第38页
    3.2.2 鳗弧菌侵染对青蛤SPI基因在血液中的表达分析第38-40页
      3.2.2.1 青蛤暂养和鳗弧菌侵染实验第38-39页
      3.2.2.2 mRNA提取及反转录第39页
      3.2.2.3 荧光定量PCR检测SPI基因的时序表达特征第39页
      3.2.2.4 数据分析第39-40页
  3.3 实验结果第40-43页
    3.3.1 青蛤总RNA的提取第40页
    3.3.2 cDNA第一链的合成第40-41页
    3.3.3 青蛤SPI基因在不同组织中的表达第41-42页
    3.3.4 青蛤SPI基因在血液中的时序性表达第42-43页
  3.4 讨论第43-45页
第四章 青蛤SPI基因的原核表达、纯化及复性第45-61页
  4.1 材料与方法第45-50页
    4.1.1 实验菌株与载体质粒第45页
    4.1.2 试剂第45-49页
    4.1.3 实验仪器第49-50页
  4.2 实验方法第50-56页
    4.2.1 青蛤SPI基因ORF的克隆第50-52页
      4.2.1.1 PCR扩增第50-51页
      4.2.1.2 连接第51页
      4.2.1.3 大肠杆菌感受态细胞的制备第51页
      4.2.1.4 转化第51-52页
      4.2.1.5 单克隆筛选及检测第52页
    4.2.2 SPI基因原核表达载体的构建第52-54页
      4.2.2.1 提取质粒第52-53页
        4.2.2.2. 双酶切第53页
        4.2.2.3. 连接第53页
        4.2.2.4. 转化第53-54页
    4.2.3 SPI基因重组蛋白的诱导表达第54-55页
    4.2.4 SPI基因重组蛋白的纯化与复性第55-56页
  4.3 实验结果第56-59页
    4.3.1 SPI基因开放阅读框的克隆第56-57页
    4.3.2 SPI基因重组载体构建第57页
    4.3.3 菌落PCR结果第57-58页
    4.3.4 重组蛋白的诱导表达第58页
    4.3.5 重组蛋白的纯化第58-59页
  4.4 讨论第59-61页
第五章 青蛤SPI基因重组蛋白的活性分析第61-70页
  5.1 实验材料第61-62页
    5.1.1 菌株与蛋白第61页
    5.1.2 实验试剂与药品第61页
    5.1.3 仪器设备第61-62页
  5.2 实验方法第62-64页
    5.2.1 酶液蛋白含量测定第62页
    5.2.2 重组蛋白活力测定第62-63页
    5.2.3 重组蛋白体外抑菌活力分析第63-64页
    5.2.4 重组蛋白体内免疫调节功能研究第64页
  5.3 实验结果第64-67页
    5.3.1 酶液蛋白含量第64页
    5.3.2 重组蛋白活力分析第64-65页
    5.3.3 重组蛋白体外抑菌活性分析第65-66页
    5.3.4 重组蛋白体内免疫调节功能研究第66-67页
  5.4 讨论第67-70页
初步结论第70-72页
参考文献第72-80页
附录第80-81页
硕士期间发表和完成的文章第80-81页
致谢第81页

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