论文目录 | |
摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-10页 |
第一章 前言 | 第10-18页 |
· 半胱氨酸脱硫酶的结构研究进展 | 第10-11页 |
· 半胱氨酸脱硫酶脱硫机制研究 | 第11-12页 |
· 硫原子的转移 | 第12页 |
· 半胱氨酸脱硫酶的功能介绍 | 第12-17页 |
· 用于铁硫簇的合成 | 第12-13页 |
· 与铁硫簇相关的含硫生物分子的合成 | 第13页 |
· tRNA硫修饰 | 第13-14页 |
· 硫胺素的合成 | 第14-15页 |
· DNA的磷硫酰化修饰 | 第15-16页 |
· 喋呤型钼辅因子的合成 | 第16-17页 |
· 课题研究目的和意义 | 第17-18页 |
第二章 dndA及突变体质粒的构建 | 第18-23页 |
· 实验材料 | 第18-19页 |
· 质粒、模板及工程菌株 | 第18页 |
· 质粒构建中主要仪器及试剂 | 第18-19页 |
· 实验方法 | 第19-21页 |
· 实验结果 | 第21-22页 |
· 小结与讨论 | 第22-23页 |
第三章 DndA及其突变体蛋白的表达纯化 | 第23-37页 |
· 实验材料 | 第23-24页 |
· 实验相关仪器 | 第23页 |
· 试验相关试剂配制 | 第23-24页 |
· 实验方法 | 第24-28页 |
· 转化表达型细胞BL_(21)(DE_3) | 第24页 |
· 小量表达优化 | 第24-25页 |
· 大量表达及纯化 | 第25-28页 |
· 蛋白浓度的测定 | 第28页 |
· 实验结果 | 第28-35页 |
· DndA(WT)蛋白的表达纯化 | 第28-31页 |
· DndA(C/S)蛋白的表达纯化 | 第31-35页 |
· 小结与讨论 | 第35-37页 |
第四章 DndA及其突变体蛋白的表征 | 第37-41页 |
· 实验材料 | 第37页 |
· 实验方法 | 第37-38页 |
· 圆二色谱(即CD谱)的表征 | 第37页 |
· 分析型(Analysis)75的表征 | 第37-38页 |
· 实验结果 | 第38-39页 |
· CD谱结果分析 | 第38-39页 |
· Analysis 75谱图分析 | 第39页 |
· 小结与讨论 | 第39-41页 |
第五章 部分标记DndA样品的制备 | 第41-61页 |
· 前言 | 第41-45页 |
· 部分标记简介 | 第41-42页 |
· 部分标记原理 | 第42-43页 |
· DndA部分标记策略的选择及操作方法 | 第43-44页 |
· DndA部分标记的研究目的及意义 | 第44-45页 |
· DndA部分标记PTS策略的体内表达 | 第45-52页 |
· DndA部分标记PTS策略体内表达质粒的构建策略 | 第45页 |
· DndA部分标记PTS策略体内表达质粒的构建 | 第45-47页 |
· DndA部分标记PTS策略体内表达重组质粒的表达检测 | 第47-48页 |
· DndA部分标记PTS策略体内表达的连接条件优化 | 第48-49页 |
· DndA部分标记PTS策略体内的大量表达及初步纯化 | 第49-51页 |
· 小结与讨论 | 第51-52页 |
· DndA部分标记PTS策略的体外表达 | 第52-55页 |
· DndA部分标记PTS策略的体外表达质粒构建策略 | 第52页 |
· 碳端加His标签的dndA_(268-380)-pSKBAD2质粒的构建 | 第52页 |
· dndA_(1-260)-pSKDUET01质粒的表达与初步纯化 | 第52-54页 |
· 碳端加His标签的dndA_(268-380)-pSKBAD2质粒的表达与初步纯化 | 第54页 |
· 小结与讨论 | 第54-55页 |
· DndA部分标记的PTS策略中氮端质粒的改造 | 第55-56页 |
· dndA_(1-260)-pSKDUET01的改造策略 | 第55-56页 |
· 氮端带Flag标签的dndA_(1-260)-pSKDUET01质粒的构建 | 第56页 |
· 小结与讨论 | 第56页 |
· 以pET28a为载体的dndA分段表达质粒的构建 | 第56-61页 |
· 以pET28a为载体的dndA分段表达质粒构建策略 | 第56-57页 |
· 以pET28a为载体的dndA分段表达质粒的构建 | 第57页 |
· dndA_(1-260)-pET28a质粒、氮端加Flag标签的dndA_(1-260)-pET28a质粒的表达与初步纯化 | 第57-59页 |
· dndA_(268-380)-pET28a重组质粒的表达与初步纯化 | 第59-60页 |
· 小结与讨论 | 第60-61页 |
第六章 总结与展望 | 第61-63页 |
参考文献 | 第63-67页 |
致谢 | 第67-68页 |
附录A 攻读硕士学位期间研究成果 | 第68-69页 |
附录B | 第69-72页 |