论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-28页 |
| · 植物萜类物质的重要作用 | 第14-15页 |
| · 植物萜类物质的合成途径 | 第15-19页 |
| · IPP和DMAPP的合成 | 第15-17页 |
| · 异戊烯基焦磷酸前体的合成 | 第17-18页 |
| · 萜类物质的形成 | 第18-19页 |
| · 萜类合成途径中关键酶定位研究 | 第19-22页 |
| · 植物萜类合酶的定位研究 | 第20页 |
| · 植物萜类合成调控研究 | 第20-22页 |
| · 萜类代谢工程 | 第22-24页 |
| · α-法尼烯及α-法尼烯合酶研究进展 | 第24-25页 |
| · AFS基因的表达及调控 | 第25-26页 |
| · 本研究的目的意义 | 第26-28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-44页 |
| · 实验材料 | 第28-29页 |
| · 植物材料 | 第28页 |
| · 菌株与质粒 | 第28页 |
| · 酶及生化试剂 | 第28页 |
| · PCR引物 | 第28-29页 |
| · 实验方法 | 第29-44页 |
| · 总RNA提取 | 第29-30页 |
| · cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| · CTAB微量法提取植物叶片基因组DNA | 第31页 |
| · 溶菌酶法提取酵母基因组 | 第31页 |
| · 基因的克隆 | 第31-35页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| · 转化及克隆筛选、测序 | 第33页 |
| · 碱法小量提取质粒DNA | 第33-34页 |
| · 酶切、回收 | 第34页 |
| · GFP表达载体的构建 | 第34-35页 |
| · pBI121+Ru+Mit-GFP重组蛋白细胞定位 | 第35页 |
| · pBI121+Ru+Pla-GFP重组蛋白细胞定位 | 第35-36页 |
| · 原生质体制备 | 第36-37页 |
| · 真核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| · 质粒pMD18-T+Ru和pBI121表达载体的酶切 | 第37-38页 |
| · 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第38页 |
| · 冻融法转化农杆菌 | 第38页 |
| · 农杆菌介导法转化烟草 | 第38-39页 |
| · 农杆菌的培养 | 第38页 |
| · 烟草转化、培养和植株再生 | 第38-39页 |
| · 转基因烟草植株的鉴定 | 第39-41页 |
| · 不同时期异戊二烯途径中关键酶基因的表达 | 第41页 |
| · 转基因烟草色素含量的测定 | 第41页 |
| · 转基因烟草挥发性物质的测定 | 第41-42页 |
| · 转基因烟草昆虫取食率的统计 | 第42页 |
| · 转基因烟草植株生理指标测定 | 第42-44页 |
| · 烟草抗氧化能力测定 | 第42页 |
| · 抗氧化酶活性的测定 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-62页 |
| · AFS、Rubisco启动子、叶绿体信号肽、线粒体转运肽基因的分离及分析 | 第44-46页 |
| · 表达载体的构建 | 第46-47页 |
| · 真核表达载体的构建 | 第46页 |
| · GFP表达载体的构建 | 第46-47页 |
| · 定位肽和Rubiscco启动子Ru功能的验证 | 第47-48页 |
| · 叶绿体信号肽功能的验证 | 第47页 |
| · 线粒体转运肽功能的验证 | 第47-48页 |
| · Rubiscco启动子Ru功能的验证 | 第48页 |
| · 转基因植株的获得和鉴定 | 第48-50页 |
| · α-AFS在烟草不同部位超表达对NtHMGR2、NtFPS和NtDXS、NtDXR基因表达的影响 | 第50-52页 |
| · α-AFS在烟草不同部位超表达对烟草色素含量的影响 | 第52-53页 |
| · 转基因植株α-AFS表达的空间特异性 | 第53-54页 |
| · 转基因烟草挥发物检测 | 第54-56页 |
| · α-AFS在烟草不同部位超表达对昆虫行为的影响 | 第56-57页 |
| · 转基因植株抗逆性检测 | 第57-62页 |
| · 转基因植株抗高温胁迫的检测 | 第57-59页 |
| · 转基因植株抗氧化能力检测 | 第59-61页 |
| · 转基因植株抗干旱胁迫的检测 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76
页 |
