论文目录 | |
摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-15页 |
第一章 引言 | 第15-22页 |
· 水貂阿留申病概述 | 第15页 |
· 水貂阿留申病毒的分子生物学研究进展 | 第15-17页 |
· ADV的基因组结构 | 第15-16页 |
· ADV基因的复制和表达 | 第16页 |
· ADV蛋白的功能 | 第16-17页 |
· 水貂阿留申病诊断方法的研究进展 | 第17-19页 |
· 病原学诊断 | 第17页 |
· 血清学诊断 | 第17-19页 |
· 分子生物学诊断 | 第19页 |
· 水貂阿留申病的防制 | 第19-20页 |
· 饲养管理 | 第19-20页 |
· 严格遵守养殖场兽医卫生制度 | 第20页 |
· 建立定期检疫淘汰制度 | 第20页 |
· 建立完善的引种检疫工作 | 第20页 |
· 培育抗病貂的新品种 | 第20页 |
· 昆虫杆状病毒表达系统 | 第20-21页 |
· 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
第二章 中国主要水貂养殖地区水貂阿留申病分子流行病学调查 | 第22-32页 |
· 简介 | 第22-23页 |
· 材料和方法 | 第23-24页 |
· 实验材料及仪器设备 | 第23页 |
· 样品的采集和处理 | 第23页 |
· AD抗体检测和AMDV基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
· VP2基因的扩增及测序 | 第24页 |
· 序列分析 | 第24页 |
· 结果 | 第24-30页 |
· AMDV抗体的检测 | 第24-26页 |
· 序列分析 | 第26-28页 |
· 系统分析 | 第28-30页 |
· 讨论 | 第30-31页 |
· 小结 | 第31-32页 |
第三章 水貂阿留申病毒结构基因VP2的表达及纯化 | 第32-44页 |
· 材料与方法 | 第32-35页 |
· 病毒和阳性血清 | 第32页 |
· 菌株、载体、细胞、试剂及仪器 | 第32页 |
· 细胞培养 | 第32页 |
· 引物设计与合成 | 第32-33页 |
· AMDV-G毒株基因组的获取及VP2基因的扩增 | 第33页 |
· 重组转移载体pFastBacl-VP2的构建 | 第33页 |
· 重组转移载体pFastBacl-VP2的转座及阳性克隆的筛选 | 第33-34页 |
· 重组杆粒Bacmid-VP2的提取和鉴定 | 第34页 |
· 转染sf9昆虫细胞 | 第34页 |
· 重组杆状病毒的收获 | 第34页 |
· VP2蛋白的表达及鉴定 | 第34-35页 |
· VP2蛋白的纯化及鉴定 | 第35页 |
· 病毒样粒子的检测 | 第35页 |
· 结果与分析 | 第35-42页 |
· AMDV-G株VP2基因的扩增 | 第35-36页 |
· 重组克隆载体T-VP2的酶切鉴定 | 第36页 |
· 重组转移载体pFastBacl-VP2的酶切鉴定 | 第36页 |
· 重组杆粒的Bacmid-VP2的PCR鉴定 | 第36页 |
· P3代病毒液感染细胞的病变 | 第36页 |
· 免疫荧光检测 | 第36页 |
· 重组蛋白的Western-b1ot检测 | 第36-40页 |
· 重组蛋白与商业抗原的CIEP对比试验 | 第40-41页 |
· 纯化后重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第41页 |
· 重组蛋白的电镜下观察 | 第41-42页 |
· 讨论 | 第42-43页 |
· 小结 | 第43-44页 |
第四章 水貂阿留申病间接ELISA检测方法的建立 | 第44-54页 |
· 材料 | 第44页 |
· 试验试剂及材料 | 第44页 |
· 主要试验仪器 | 第44页 |
· 试验方法 | 第44-47页 |
· 蛋白含量的测定 | 第44页 |
· 确定间接ELISA各种参数的具体操作方法(方阵滴定法) | 第44-45页 |
· 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第45页 |
· 抗原最佳包被条件的确定 | 第45页 |
· 最佳封闭液的选择 | 第45页 |
· 最佳血清稀释液的选择 | 第45页 |
· 最佳血清反应条件的选择 | 第45-46页 |
· 酶标二抗最佳工作浓度的选择 | 第46页 |
· 酶标二抗最佳反应时间的选择 | 第46页 |
· 底物最佳作用时间的选择 | 第46页 |
· 临界值的判定 | 第46页 |
· 特异性检验 | 第46页 |
· 敏感性检验 | 第46页 |
· 重复性试验 | 第46-47页 |
· AMDV-VP2-ELISA与CIEP的符合性试验 | 第47页 |
· 结果 | 第47-52页 |
· 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度 | 第47页 |
· 抗原最佳包被条件 | 第47页 |
· 最佳封闭液选择 | 第47-48页 |
· 最佳血清稀释液 | 第48页 |
· 最佳血清反应条件 | 第48-49页 |
· 酶标二抗最佳工作浓度 | 第49页 |
· 酶标二抗最佳反应时间 | 第49-50页 |
· 底物最佳作用时间 | 第50页 |
· 临界值的确定 | 第50页 |
· 特异性检验 | 第50-51页 |
· 敏感性检验 | 第51页 |
· 重复性试验 | 第51-52页 |
· AMDV-VP2-ELISA与CIEP的符合性试验 | 第52页 |
· 讨论 | 第52页 |
· 小结 | 第52-54页 |
第五章 结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-59页 |
附录 | 第59-63页 |
附录1 实验所用仪器汇总 | 第59-60页 |
附录2 含HIs纯化标签的VP2基因序列测序结果 | 第60-61页 |
附录3 实验所需溶液配方 | 第61-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
作者简历 | 第64
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