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水貂阿留申病分子流行病学调查和间接ELISA检测方法的建立

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水貂阿留申病分子流行病学调查和间接ELISA检测方法的建立
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-15页
第一章 引言第15-22页
  · 水貂阿留申病概述第15页
  · 水貂阿留申病毒的分子生物学研究进展第15-17页
    · ADV的基因组结构第15-16页
    · ADV基因的复制和表达第16页
    · ADV蛋白的功能第16-17页
  · 水貂阿留申病诊断方法的研究进展第17-19页
    · 病原学诊断第17页
    · 血清学诊断第17-19页
    · 分子生物学诊断第19页
  · 水貂阿留申病的防制第19-20页
    · 饲养管理第19-20页
    · 严格遵守养殖场兽医卫生制度第20页
    · 建立定期检疫淘汰制度第20页
    · 建立完善的引种检疫工作第20页
    · 培育抗病貂的新品种第20页
  · 昆虫杆状病毒表达系统第20-21页
  · 本研究的目的及意义第21-22页
第二章 中国主要水貂养殖地区水貂阿留申病分子流行病学调查第22-32页
  · 简介第22-23页
  · 材料和方法第23-24页
    · 实验材料及仪器设备第23页
    · 样品的采集和处理第23页
    · AD抗体检测和AMDV基因组DNA的提取第23-24页
    · VP2基因的扩增及测序第24页
    · 序列分析第24页
  · 结果第24-30页
    · AMDV抗体的检测第24-26页
    · 序列分析第26-28页
    · 系统分析第28-30页
  · 讨论第30-31页
  · 小结第31-32页
第三章 水貂阿留申病毒结构基因VP2的表达及纯化第32-44页
  · 材料与方法第32-35页
    · 病毒和阳性血清第32页
    · 菌株、载体、细胞、试剂及仪器第32页
    · 细胞培养第32页
    · 引物设计与合成第32-33页
    · AMDV-G毒株基因组的获取及VP2基因的扩增第33页
    · 重组转移载体pFastBacl-VP2的构建第33页
    · 重组转移载体pFastBacl-VP2的转座及阳性克隆的筛选第33-34页
    · 重组杆粒Bacmid-VP2的提取和鉴定第34页
    · 转染sf9昆虫细胞第34页
    · 重组杆状病毒的收获第34页
    · VP2蛋白的表达及鉴定第34-35页
    · VP2蛋白的纯化及鉴定第35页
    · 病毒样粒子的检测第35页
  · 结果与分析第35-42页
    · AMDV-G株VP2基因的扩增第35-36页
    · 重组克隆载体T-VP2的酶切鉴定第36页
    · 重组转移载体pFastBacl-VP2的酶切鉴定第36页
    · 重组杆粒的Bacmid-VP2的PCR鉴定第36页
    · P3代病毒液感染细胞的病变第36页
    · 免疫荧光检测第36页
    · 重组蛋白的Western-b1ot检测第36-40页
    · 重组蛋白与商业抗原的CIEP对比试验第40-41页
    · 纯化后重组蛋白的SDS-PAGE检测第41页
    · 重组蛋白的电镜下观察第41-42页
  · 讨论第42-43页
  · 小结第43-44页
第四章 水貂阿留申病间接ELISA检测方法的建立第44-54页
  · 材料第44页
    · 试验试剂及材料第44页
    · 主要试验仪器第44页
  · 试验方法第44-47页
    · 蛋白含量的测定第44页
    · 确定间接ELISA各种参数的具体操作方法(方阵滴定法)第44-45页
    · 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定第45页
    · 抗原最佳包被条件的确定第45页
    · 最佳封闭液的选择第45页
    · 最佳血清稀释液的选择第45页
    · 最佳血清反应条件的选择第45-46页
    · 酶标二抗最佳工作浓度的选择第46页
    · 酶标二抗最佳反应时间的选择第46页
    · 底物最佳作用时间的选择第46页
    · 临界值的判定第46页
    · 特异性检验第46页
    · 敏感性检验第46页
    · 重复性试验第46-47页
    · AMDV-VP2-ELISA与CIEP的符合性试验第47页
  · 结果第47-52页
    · 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度第47页
    · 抗原最佳包被条件第47页
    · 最佳封闭液选择第47-48页
    · 最佳血清稀释液第48页
    · 最佳血清反应条件第48-49页
    · 酶标二抗最佳工作浓度第49页
    · 酶标二抗最佳反应时间第49-50页
    · 底物最佳作用时间第50页
    · 临界值的确定第50页
    · 特异性检验第50-51页
    · 敏感性检验第51页
    · 重复性试验第51-52页
    · AMDV-VP2-ELISA与CIEP的符合性试验第52页
  · 讨论第52页
  · 小结第52-54页
第五章 结论第54-55页
参考文献第55-59页
附录第59-63页
  附录1 实验所用仪器汇总第59-60页
  附录2 含HIs纯化标签的VP2基因序列测序结果第60-61页
  附录3 实验所需溶液配方第61-63页
致谢第63-64页
作者简历第64 页

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