论文目录 | |
符号说明 | 第1-10页 |
中文摘要 | 第10-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
1 引言 | 第13-27页 |
· 呼肠孤病毒概述 | 第13-14页 |
· 禽呼肠孤病毒血清型 | 第14页 |
· 新型番鸭呼肠孤病毒(N-MDRV) | 第14-15页 |
· N-MDRV 病毒特征 | 第15-17页 |
· N-MDRV 病毒培养 | 第17页 |
· N-MDRV 表达的主要蛋白 | 第17-22页 |
· N-MDRV 与 MDRV 感染引起的病理变化比较 | 第22-23页 |
· 禽呼肠孤病毒病检测方法 | 第23-25页 |
· 血清学检测 | 第24页 |
· 分子生物学检测 | 第24-25页 |
· 番鸭呼肠孤病毒疫苗研究 | 第25-26页 |
· 灭活苗 | 第25页 |
· 活疫苗(弱毒苗) | 第25页 |
· 基因工程苗 | 第25-26页 |
· MDRV σ C 基因研究进展 | 第26-27页 |
· 本研究的目的与意义 | 第27页 |
2 实验材料与方法 | 第27-38页 |
· 实验材料 | 第27-28页 |
· 菌株与试剂 | 第27-28页 |
· 实验动物 | 第28页 |
· 实验方法 | 第28-35页 |
· 引物设计与合成 | 第28页 |
· N-MDRV 培养 | 第28页 |
· 病毒模板的制备 | 第28-29页 |
· RT-PCR 扩增 N-MDRV σC 基因 | 第29页 |
· 重组克隆载体的构建与鉴定 | 第29-32页 |
· N-MDRV σC 基因的回收与纯化 | 第29-30页 |
· N-MDRV σC 基因的克隆与鉴定 | 第30-31页 |
· 重组质粒的序列测定与序列分析 | 第31页 |
· 原核表达载体 pET28a-σC 的构建与鉴定 | 第31-32页 |
· 重组σC 蛋白的表达与鉴定 | 第32-35页 |
· 重组σC 蛋白的初步表达鉴定 | 第32页 |
· IPTG 最佳诱导浓度的确定 | 第32-33页 |
· IPTG 最佳诱导时间的确定 | 第33页 |
· 重组σC 蛋白细胞定位分析 | 第33-35页 |
· 重组σC 蛋白免疫印记分析(Western Blot) | 第35-36页 |
· SDS-PAGE 电泳 | 第35页 |
· Western Blot 过程 | 第35-36页 |
· 重组σC 蛋白间接免疫荧光分析(IFA) | 第36页 |
· 间接 ELISA 检测方法的建立 | 第36-38页 |
· 间接 ELISA 反应条件的优化 | 第37页 |
· 封闭液的选择 | 第37页 |
· 抗原包被浓度与血清稀释度的选择 | 第37页 |
· 一抗血清最佳作用时间的选择 | 第37页 |
· 酶标二抗最佳作用时间的选择 | 第37页 |
· 间接 ELISA 检测方法阴阳性临界值的确定 | 第37页 |
· 间接 ELISA 检测方法重复性实验 | 第37-38页 |
· 间接 ELISA 检测方法敏感性实验 | 第38页 |
· 间接 ELISA 检测方法特异性实验 | 第38页 |
· 临床样品的检测 | 第38页 |
3 实验结果 | 第38-49页 |
· RT-PCR 结果 | 第38-39页 |
· 重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
· 重组质粒 pMD-18T-σC 的鉴定 | 第39页 |
· 重组质粒 pET-28a-σC 的鉴定 | 第39-40页 |
· 重组σC 蛋白在大肠杆菌中的表达分析 | 第40-43页 |
· 重组 pET-28a-σC 质粒转化进 E.coli BL21(DE3)后的鉴定分析 | 第40页 |
· 重组σC 蛋白的初步表达鉴定 | 第40-41页 |
· 重组σC 蛋白诱导表达条件优化 | 第41-43页 |
· 重组σC 蛋白诱导表达 IPTG 最佳浓度的优化 | 第41-42页 |
· 重组σC 蛋白诱导最佳时间的优化 | 第42页 |
· 重组σC 表达蛋白细胞定位分析 | 第42页 |
· 重组σC 表达蛋白亲和层析纯化与切胶纯化比较 | 第42-43页 |
· 重组σC 表达蛋白免疫印记分析(Western Blot) | 第43页 |
· 重组σC 表达蛋白间接免疫荧光分析(IFA) | 第43-44页 |
· 间接 ELISA 反应条件的优化 | 第44-47页 |
· 封闭液的选择 | 第44-45页 |
· 蛋白最适包被浓度与血清稀释度的确定 | 第45页 |
· 酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第45-46页 |
· 血清与二抗最佳反应时间的确定 | 第46页 |
· 间接 ELISA 检测方法阴阳性临界值的确定 | 第46-47页 |
· 间接 ELISA 检测方法重复性实验 | 第47-48页 |
· 批内重复性实验 | 第47页 |
· 批间重复性实验 | 第47-48页 |
· 间接 ELISA 检测方法敏感性实验 | 第48页 |
· 间接 ELISA 检测方法特异性实验 | 第48-49页 |
· 临床样品的检测 | 第49页 |
4 讨论 | 第49-52页 |
· 目的基因的选择 | 第49-50页 |
· N-MDRV σC 蛋白基因的融合表达 | 第50页 |
· N-MDRV σC 蛋白的纯化 | 第50-51页 |
· N-MDRV σC 蛋白抗原特性分析 | 第51-52页 |
· 间接 ELISA 检测方法分析 | 第52页 |
5 结论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-58页 |
致谢 | 第58-59页 |
作者简介及硕士期间发表论文情况 | 第59-60页 |
附录 | 第60-61
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