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新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及应用
论文目录
 
符号说明第1-10页
中文摘要第10-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-27页
  · 呼肠孤病毒概述第13-14页
  · 禽呼肠孤病毒血清型第14页
  · 新型番鸭呼肠孤病毒(N-MDRV)第14-15页
  · N-MDRV 病毒特征第15-17页
  · N-MDRV 病毒培养第17页
  · N-MDRV 表达的主要蛋白第17-22页
  · N-MDRV 与 MDRV 感染引起的病理变化比较第22-23页
  · 禽呼肠孤病毒病检测方法第23-25页
    · 血清学检测第24页
    · 分子生物学检测第24-25页
  · 番鸭呼肠孤病毒疫苗研究第25-26页
    · 灭活苗第25页
    · 活疫苗(弱毒苗)第25页
    · 基因工程苗第25-26页
  · MDRV σ C 基因研究进展第26-27页
  · 本研究的目的与意义第27页
2 实验材料与方法第27-38页
  · 实验材料第27-28页
    · 菌株与试剂第27-28页
    · 实验动物第28页
  · 实验方法第28-35页
    · 引物设计与合成第28页
    · N-MDRV 培养第28页
    · 病毒模板的制备第28-29页
    · RT-PCR 扩增 N-MDRV σC 基因第29页
    · 重组克隆载体的构建与鉴定第29-32页
      · N-MDRV σC 基因的回收与纯化第29-30页
      · N-MDRV σC 基因的克隆与鉴定第30-31页
      · 重组质粒的序列测定与序列分析第31页
      · 原核表达载体 pET28a-σC 的构建与鉴定第31-32页
    · 重组σC 蛋白的表达与鉴定第32-35页
      · 重组σC 蛋白的初步表达鉴定第32页
      · IPTG 最佳诱导浓度的确定第32-33页
      · IPTG 最佳诱导时间的确定第33页
      · 重组σC 蛋白细胞定位分析第33-35页
  · 重组σC 蛋白免疫印记分析(Western Blot)第35-36页
    · SDS-PAGE 电泳第35页
    · Western Blot 过程第35-36页
  · 重组σC 蛋白间接免疫荧光分析(IFA)第36页
  · 间接 ELISA 检测方法的建立第36-38页
    · 间接 ELISA 反应条件的优化第37页
      · 封闭液的选择第37页
      · 抗原包被浓度与血清稀释度的选择第37页
      · 一抗血清最佳作用时间的选择第37页
      · 酶标二抗最佳作用时间的选择第37页
    · 间接 ELISA 检测方法阴阳性临界值的确定第37页
    · 间接 ELISA 检测方法重复性实验第37-38页
    · 间接 ELISA 检测方法敏感性实验第38页
    · 间接 ELISA 检测方法特异性实验第38页
    · 临床样品的检测第38页
3 实验结果第38-49页
  · RT-PCR 结果第38-39页
  · 重组质粒的鉴定第39-40页
    · 重组质粒 pMD-18T-σC 的鉴定第39页
    · 重组质粒 pET-28a-σC 的鉴定第39-40页
  · 重组σC 蛋白在大肠杆菌中的表达分析第40-43页
    · 重组 pET-28a-σC 质粒转化进 E.coli BL21(DE3)后的鉴定分析第40页
    · 重组σC 蛋白的初步表达鉴定第40-41页
    · 重组σC 蛋白诱导表达条件优化第41-43页
      · 重组σC 蛋白诱导表达 IPTG 最佳浓度的优化第41-42页
      · 重组σC 蛋白诱导最佳时间的优化第42页
      · 重组σC 表达蛋白细胞定位分析第42页
      · 重组σC 表达蛋白亲和层析纯化与切胶纯化比较第42-43页
  · 重组σC 表达蛋白免疫印记分析(Western Blot)第43页
  · 重组σC 表达蛋白间接免疫荧光分析(IFA)第43-44页
  · 间接 ELISA 反应条件的优化第44-47页
    · 封闭液的选择第44-45页
    · 蛋白最适包被浓度与血清稀释度的确定第45页
    · 酶标二抗最佳工作浓度的确定第45-46页
    · 血清与二抗最佳反应时间的确定第46页
    · 间接 ELISA 检测方法阴阳性临界值的确定第46-47页
  · 间接 ELISA 检测方法重复性实验第47-48页
    · 批内重复性实验第47页
    · 批间重复性实验第47-48页
  · 间接 ELISA 检测方法敏感性实验第48页
  · 间接 ELISA 检测方法特异性实验第48-49页
  · 临床样品的检测第49页
4 讨论第49-52页
  · 目的基因的选择第49-50页
  · N-MDRV σC 蛋白基因的融合表达第50页
  · N-MDRV σC 蛋白的纯化第50-51页
  · N-MDRV σC 蛋白抗原特性分析第51-52页
  · 间接 ELISA 检测方法分析第52页
5 结论第52-53页
参考文献第53-58页
致谢第58-59页
作者简介及硕士期间发表论文情况第59-60页
附录第60-61 页

本篇论文共61页,点击这进入下载页面
 
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