基于猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白及抗原表位的间接ELISA检测方法的建立 |
论文目录 | | | 摘要 | 第1-8页 | | ABSTRACT | 第8-10页 | | 缩略语表 | 第10-11页 | | · 文献综述 | 第11-19页 | | · PRRSV的分子生物学特征 | 第11-15页 | | · PRRSV基因组结构 | 第11-12页 | | · PRRSV非结构蛋白的功能 | 第12-13页 | | · PRRSV结构蛋白的功能 | 第13-15页 | | · PRRSV体液免疫和细胞免疫的研究进展 | 第15页 | | · PRRSV体液免疫研究进展 | 第15页 | | · PRRSV细胞免疫研究进展 | 第15页 | | · PRRSV疫苗研究进展 | 第15-16页 | | · 弱毒活疫苗 | 第15-16页 | | · 灭活疫苗 | 第16页 | | · 基因工程疫苗 | 第16页 | | · PRRSV诊断方法的研究进展 | 第16-18页 | | · 临床症状与病理变化 | 第16-17页 | | · 病毒分离与分子生物学诊断方法 | 第17页 | | · 血清学诊断 | 第17-18页 | | · 本研究的目的与意义 | 第18-19页 | | · 材料和方法 | 第19-34页 | | · 材料 | 第19-22页 | | · 毒株,菌株,实验动物和多肽 | 第19页 | | · 载体与试剂 | 第19页 | | · 引物的设计与合成 | 第19-20页 | | · 抗体 | 第20页 | | · 血清 | 第20页 | | · SDS-PAGE和Western blot试剂和溶液 | 第20页 | | · 培养基的配制 | 第20-21页 | | · 间接ELISA所需试剂的配制 | 第21页 | | · 主要仪器 | 第21页 | | · 其他试剂耗材 | 第21-22页 | | · 方法 | 第22-34页 | | · PRRSV病毒的培养 | 第22页 | | · PRRSV的RNA提取 | 第22-23页 | | · PRRSV ORF7基因的PCR扩增与检测 | 第23页 | | · PCR产物的回收和纯化 | 第23-24页 | | · 纯化产物和T载体连接 | 第24页 | | · 连接产物转化到DH5α | 第24页 | | · 重组质粒的提取 | 第24-25页 | | · ORF7基因片段的序列测定及分析 | 第25页 | | · 原核表达载体pET32a-ORF7的构建 | 第25-27页 | | · 重组表达质粒转化到大肠杆菌BL_(21)(DE3)感受态 | 第27页 | | · 重组表达质粒pET32a-ORF7在大肠杆菌BE_(21)(DE3)中的诱导表达 | 第27页 | | · 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第27-28页 | | · 表达产物的纯化 | 第28-30页 | | · 表达产物的Western blot检测 | 第30页 | | · PRRSV N蛋白两个抗原表位的合成肽的分析与合成 | 第30-31页 | | · 间接ELISA方法的操作程序 | 第31页 | | · 重组N蛋白,P30,P32间接ELISA方法最佳反应条件的确定 | 第31-34页 | | · 结果与分析 | 第34-50页 | | · ORF7基因PCR扩增结果 | 第34页 | | · 原核表达载体pET32a-ORF7鉴定 | 第34-35页 | | · 原核表达载体pET32a-ORF7在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-36页 | | · 表达产物的纯化 | 第36页 | | · 纯化蛋白的浓度的测定 | 第36页 | | · 表达产物的Western blot鉴定 | 第36-37页 | | · N蛋白抗原表位的合成肽P30和P32的选取 | 第37页 | | · 间接ELISA方法最佳反应条件的确定 | 第37-50页 | | · 合成肽最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第37-39页 | | · 最佳二抗稀释倍数的确定 | 第39-40页 | | · 判定标准的确定 | 第40-41页 | | · 特异性试验结果 | 第41页 | | · 敏感性试验 | 第41-42页 | | · 重复性试验结果 | 第42-44页 | | · 临床样品检测 | 第44-50页 | | · 讨论 | 第50-53页 | | · PRRSV ORF7基因的选择 | 第50页 | | · N蛋白两个抗原表位的选择 | 第50-51页 | | · 关于间接ELISA方法的建立 | 第51页 | | · 建立的ELISA方法和商品化试剂盒的比较 | 第51-53页 | | · 结论 | 第53-54页 | | 参考文献 | 第54-61页 | | 致谢 | 第61
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