论文目录 | |
| 目录 | 第1-2
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| 独创性说明 | 第2
页 |
| 关于论文使用授权的说明 | 第2-3
页 |
| 摘要 | 第3-4
页 |
| Abstract | 第4-9
页 |
| 第一章 引言 | 第9-15
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| · 防御素基因工程研究进展 | 第9-14
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| · 防御素简介 | 第9
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| · 用低等微生物表达防御素的研究 | 第9-10
页 |
| · 用原核微生物表达防御素的研究 | 第9-10
页 |
| · 用真核微生物表达防御素的研究 | 第10
页 |
| · 防御素基因转化高等植物的研究 | 第10-11
页 |
| · 防御素基因转化烟草的研究 | 第10
页 |
| · 转基因拟南芥的研究 | 第10-11
页 |
| · 转基因土豆的研究 | 第11
页 |
| · 其它转基因植物 | 第11
页 |
| · 用动物细胞表达防御素的研究 | 第11-12
页 |
| · 用COS-7细胞表达防御素的研究 | 第11
页 |
| · 人α防御素HNP1转导气管上皮细胞的研究 | 第11-12
页 |
| · 转基因蚊子的研究 | 第12
页 |
| · 防御素转基因物种小结 | 第12-13
页 |
| · 防御素基因工程研究现状与前景 | 第13-14
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| · 本研究的目的和意义 | 第14-15
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| 第二章 兔防御素基因的原核表达与蛋白纯化 | 第15-30
页 |
| · 前言 | 第15
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| · 实验材料 | 第15-16
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| · 菌株与质粒 | 第15
页 |
| · 酶和主要试剂 | 第15
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| · PCR引物 | 第15
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| · 培养基 | 第15-16
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| · 仪器设备 | 第16
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| · 实验方法 | 第16-25
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| · 载体构建中的相关方法 | 第16-18
页 |
| · 小量碱法提取质粒 | 第16-17
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| · 质粒的酶切 | 第17
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| · 酶切片段的去磷酸化 | 第17
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| · 目的片段的回收 | 第17
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| · 目的片段的连接 | 第17
页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第17
页 |
| · 反应物的转化 | 第17-18
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| · PCR初步筛选重组转化子 | 第18
页 |
| · 酶切检测重组载体及目的片段的正反连接 | 第18
页 |
| · 原核表达载体pTYB_2-NP1，pTYB_(12)-NP1，pET-32a-NP1的构建 | 第18-22
页 |
| · 重组质粒转化表达菌株大肠杆菌(E.coli)BL21 | 第22
页 |
| · 转基因大肠杆菌(E.coli)BL21阳性克隆的诱导表达 | 第22
页 |
| · 转基因大肠杆菌可溶性总蛋白的提取 | 第22
页 |
| · 过层析柱纯化目的蛋白 | 第22-23
页 |
| · 蛋白透析及浓缩 | 第23
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| · Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白 | 第23-25
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| · 实验结果与分析 | 第25-28
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| · 重组载体pTYB_2-NP1，pTYB_(12)-NP1，pET-32a-NP1的构建 | 第25-28
页 |
| · PCR初步筛选重组转化子实验结果 | 第25-26
页 |
| · 酶切检测重组载体及目的片段的正反连接 | 第26-28
页 |
| · Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白实验结果 | 第28
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| · 本章小结与讨论 | 第28-30
页 |
| · 蛋白表达与纯化 | 第28
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| · 目的基因翻译后的修饰 | 第28-29
页 |
| · 防御素的空间结构与生物学活性的关系 | 第29-30
页 |
| 第三章 防御素基因的真核表达及蛋白纯化研究 | 第30-50
页 |
| · 前言 | 第30
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| · 实验材料 | 第30-31
页 |
| · 藻种 | 第30
页 |
| · 菌种和质粒 | 第30
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| · 酶和试剂 | 第30
页 |
| · 培养基 | 第30-31
页 |
| · PCR引物 | 第31
页 |
| · 实验方法 | 第31-41
页 |
| · 载体构建中的相关方法 | 第31-32
页 |
| · 蓝白斑筛选 | 第31-32
页 |
| · 其它方法: | 第32
页 |
| · 防御素小球藻表达载体pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1、pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1的构建 | 第32-36
页 |
| · 小球藻pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1的构建 | 第32
页 |
| · 小球藻表达载体pBinNRpro-HisNP1的构建 | 第32-36
页 |
| · 小球藻的电激转化 | 第36
页 |
| · 小球藻总DNA提取及PCR检测 | 第36-37
页 |
| · 小球藻总DNA的提取(改良CTAB法) | 第36-37
页 |
| · 转基因小球藻的PCR检测 | 第37
页 |
| · 转基因小球藻Southern点杂交检测 | 第37-39
页 |
| · 预杂交 | 第37-38
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| · 探针标记 | 第38
页 |
| · 杂交和压片 | 第38-39
页 |
| · 转基因小球藻可溶性总蛋白的提取 | 第39
页 |
| · 转基因小球藻可溶性总蛋白抑菌分析 | 第39
页 |
| · 五种不同启动子的活性比较 | 第39
页 |
| · 利用亲和层析纯化目的蛋白 | 第39-40
页 |
| · Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白 | 第40-41
页 |
| · 经层析纯化的目的蛋白活性检测 | 第41
页 |
| · 结果与分析 | 第41-49
页 |
| · 小球藻pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1、pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1表达载体的构建 | 第41-44
页 |
| · pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1表达载体的构建 | 第41-42
页 |
| · pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1表达载体的构建 | 第42-44
页 |
| · 用载体pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1、pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1转化小球藻 | 第44-45
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| · 转基因小球藻的PCR检测 | 第45
页 |
| · 转基因小球藻的Southern点杂交 | 第45-46
页 |
| · 转基因小球藻总蛋白提取液的抑菌分析 | 第46-47
页 |
| · 五种不同启动子的活性比较 | 第47-48
页 |
| · Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白 | 第48
页 |
| · 经层析纯化的目的蛋白活性检测 | 第48-49
页 |
| · 本章小结 | 第49-50
页 |
| 第四章 结论 | 第50-51
页 |
| 参考文献 | 第51-54
页 |
| 个人简介 | 第54-55
页 |
| 导师简介 | 第55-56
页 |
| 致谢 | 第56页 |
