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白桦环阿齐醇合酶(CAS)基因RNAi载体构建及遗传转化初步研究

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白桦环阿齐醇合酶(CAS)基因RNAi载体构建及遗传转化初步研究
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-8页
1 绪论第11-21页
    1.1 研究目的与意义第11页
    1.2 国内外研究动态第11-21页
        1.2.1 白桦三萜化合物第11-12页
        1.2.2 三萜化合物合成途径第12-13页
        1.2.3 植物次级代谢途径的调控第13-14页
        1.2.4 RNAi技术概述第14-20页
        1.2.5 基因的生物信息学分析第20-21页
2. 白桦固醇基因BPX克隆及生物信息学分析第21-35页
    2.1 材料与方法第21-24页
        2.1.1 实验材料与试剂第21页
        2.1.2 实验方法第21-24页
    2.2 结果与分析第24-33页
        2.2.1 BPX基因全长序列克隆第24页
        2.2.2 BPX3全长基因生物信息学分析第24-33页
    2.3 讨论第33页
    2.4 小结第33-35页
3 白桦植株中BPX基因表达特征分析第35-41页
    3.1 材料与方法第35-37页
        3.1.1 实验材料第35页
        3.1.2 主要酶及化学试剂第35页
        3.1.3 实验方法第35-37页
    3.2 结果与分析第37-39页
        3.2.1 不同树龄白桦植株中白桦酯醇和齐墩果酸含量与分布第37页
        3.2.2 RNA纯度和完整性检测第37-38页
        3.2.3 植株中白桦三萜基因表达组织特异性第38-39页
    3.3 讨论第39-40页
    3.4 小结第40-41页
4 白桦CAS基因干扰载体的构建第41-52页
    4.1 材料与方法第42-46页
        4.1.1 实验材料第42页
        4.1.2 实验试剂第42页
        4.1.3 实验方法第42-46页
    4.2 结果与分析第46-50页
        4.2.1 白桦BPX1基因干扰片段的选择与引物的设计第46-48页
        4.2.2 BPX1干扰片段的获得以及pGG-BPX1干扰载体的构建第48页
        4.2.3 pGG-BPX1干扰载体转化农杆菌的鉴定第48-49页
        4.2.4 化学合成法获得BPX2 RNAi表达载体第49-50页
        4.2.6 干扰载体转化农杆菌的鉴定第50页
    4.3 讨论第50-51页
    4.4 小结第51-52页
5 白桦BPX2 RNAi遗传转化及对三萜途径关键酶基因表达的影响第52-63页
    5.1 材料与试剂第52页
        5.1.1 材料第52页
        5.1.2 实验试剂第52页
    5.2 实验方法第52-56页
        5.2.1 白桦组培苗的诱导第52页
        5.2.2 农杆菌侵染白桦组培苗第52-53页
        5.2.3 转基因植株DNA的提取(Tris-CTAB法)第53页
        5.2.4 转基因白桦的PCR鉴定第53-54页
        5.2.5 转基因白桦的Southern印迹鉴定第54-55页
        5.2.6 野生型以及转基因白桦组培苗RNA的提取及反转录cDNA第55页
        5.2.7 实时荧光定量PCR检测三萜合成基因的表达第55页
        5.2.8 三萜合成关键酶基因表达量的计算第55页
        5.2.9 HPLC检测转基因愈伤中三萜化合物含量第55-56页
    5.3 结果与分析第56-60页
        5.3.1 白桦遗传转化第56页
        5.3.2 转基因白桦植株的鉴定第56-57页
        5.3.3 转基因白桦的Southern印迹鉴定第57-58页
        5.3.4 实时荧光定量PCR检测三萜合成基因的表达第58-59页
        5.3.5 HPLC检测转基因愈伤中三萜化合物含量第59-60页
    5.4 讨论第60-62页
    5.5 小结第62-63页
结论第63-65页
参考文献第65-71页
附录第71-74页
攻读学位期间发表的学术论文第74-75页
致谢第75-76页

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