论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第11页 |
| 1.2 国内外研究动态 | 第11-21页 |
| 1.2.1 白桦三萜化合物 | 第11-12页 |
| 1.2.2 三萜化合物合成途径 | 第12-13页 |
| 1.2.3 植物次级代谢途径的调控 | 第13-14页 |
| 1.2.4 RNAi技术概述 | 第14-20页 |
| 1.2.5 基因的生物信息学分析 | 第20-21页 |
| 2. 白桦固醇基因BPX克隆及生物信息学分析 | 第21-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-33页 |
| 2.2.1 BPX基因全长序列克隆 | 第24页 |
| 2.2.2 BPX3全长基因生物信息学分析 | 第24-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33页 |
| 2.4 小结 | 第33-35页 |
| 3 白桦植株中BPX基因表达特征分析 | 第35-41页 |
| 3.1 材料与方法 | 第35-37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.2 主要酶及化学试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.2.1 不同树龄白桦植株中白桦酯醇和齐墩果酸含量与分布 | 第37页 |
| 3.2.2 RNA纯度和完整性检测 | 第37-38页 |
| 3.2.3 植株中白桦三萜基因表达组织特异性 | 第38-39页 |
| 3.3 讨论 | 第39-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-41页 |
| 4 白桦CAS基因干扰载体的构建 | 第41-52页 |
| 4.1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第42-46页 |
| 4.2 结果与分析 | 第46-50页 |
| 4.2.1 白桦BPX1基因干扰片段的选择与引物的设计 | 第46-48页 |
| 4.2.2 BPX1干扰片段的获得以及pGG-BPX1干扰载体的构建 | 第48页 |
| 4.2.3 pGG-BPX1干扰载体转化农杆菌的鉴定 | 第48-49页 |
| 4.2.4 化学合成法获得BPX2 RNAi表达载体 | 第49-50页 |
| 4.2.6 干扰载体转化农杆菌的鉴定 | 第50页 |
| 4.3 讨论 | 第50-51页 |
| 4.4 小结 | 第51-52页 |
| 5 白桦BPX2 RNAi遗传转化及对三萜途径关键酶基因表达的影响 | 第52-63页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第52页 |
| 5.1.1 材料 | 第52页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-56页 |
| 5.2.1 白桦组培苗的诱导 | 第52页 |
| 5.2.2 农杆菌侵染白桦组培苗 | 第52-53页 |
| 5.2.3 转基因植株DNA的提取(Tris-CTAB法) | 第53页 |
| 5.2.4 转基因白桦的PCR鉴定 | 第53-54页 |
| 5.2.5 转基因白桦的Southern印迹鉴定 | 第54-55页 |
| 5.2.6 野生型以及转基因白桦组培苗RNA的提取及反转录cDNA | 第55页 |
| 5.2.7 实时荧光定量PCR检测三萜合成基因的表达 | 第55页 |
| 5.2.8 三萜合成关键酶基因表达量的计算 | 第55页 |
| 5.2.9 HPLC检测转基因愈伤中三萜化合物含量 | 第55-56页 |
| 5.3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 5.3.1 白桦遗传转化 | 第56页 |
| 5.3.2 转基因白桦植株的鉴定 | 第56-57页 |
| 5.3.3 转基因白桦的Southern印迹鉴定 | 第57-58页 |
| 5.3.4 实时荧光定量PCR检测三萜合成基因的表达 | 第58-59页 |
| 5.3.5 HPLC检测转基因愈伤中三萜化合物含量 | 第59-60页 |
| 5.4 讨论 | 第60-62页 |
| 5.5 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 | 第71-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
