论文目录 | |
摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
1 绪论 | 第9-18页 |
1.1 柽柳简介 | 第9页 |
1.2 硫氧还蛋白及Trx基因的研究现状 | 第9-17页 |
1.2.1 Trx蛋白的种类及分布 | 第10-13页 |
1.2.2 Tx蛋白的结构及其性质 | 第13-14页 |
1.2.3 Trx蛋白的功能 | 第14-17页 |
1.3 本课题的主要研究背景,目的及意义 | 第17页 |
1.4 技术路线 | 第17-18页 |
2 柽柳ThTrx基因的生物信息学分析及表达分析 | 第18-28页 |
2.1 材料 | 第18页 |
2.1.1 植物材料 | 第18页 |
2.1.2 试剂与仪器 | 第18页 |
2.2 方法 | 第18-19页 |
2.2.1 ThTrx基因序列的获得与分析 | 第18页 |
2.2.2 ThTrx基因在逆境胁迫下的表达分析 | 第18-19页 |
2.3 结果与分析 | 第19-27页 |
2.3.1 ThTrx基因序列分析 | 第19-21页 |
2.3.2 柽柳硫氧还蛋白基因在逆境胁迫下的表达分析 | 第21-27页 |
2.4 本章小结 | 第27-28页 |
3 柽柳ThTrx5基因耐盐性分析 | 第28-37页 |
3.1 材料 | 第28页 |
3.1.1 植物材料 | 第28页 |
3.1.2 菌种与载体 | 第28页 |
3.1.3 酶及试剂 | 第28页 |
3.2 方法 | 第28-33页 |
3.2.1 柽柳ThTrx5基因的克隆 | 第28-30页 |
3.2.2 柽柳ThTrx5基因的植物表达载体构建 | 第30-31页 |
3.2.3 拟南芥遗传转化 | 第31-33页 |
3.2.4 转ThTrx5基因拟南芥在盐胁迫下的抗逆分析 | 第33页 |
3.3 结果与分析 | 第33-36页 |
3.3.1 柽柳ThTrx5基因克隆及植物表达载体构建 | 第33-34页 |
3.3.2 转基因拟南芥的筛选与检测 | 第34-35页 |
3.3.3 转基因拟南芥在盐胁迫下的抗逆分析 | 第35-36页 |
3.4 本章小结 | 第36-37页 |
4 柽柳ThTrx5互作蛋白的筛选 | 第37-45页 |
4.1 材料 | 第37-38页 |
4.1.1 菌株及载体 | 第37页 |
4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
4.1.3 植物材料 | 第37页 |
4.1.4 主要培养基与试剂配制 | 第37-38页 |
4.1.5 主要试验仪器 | 第38页 |
4.2 方法 | 第38-41页 |
4.2.1 原核表达载体的构建与鉴定 | 第38页 |
4.2.2 重组质粒pET41a::Trx5转入Rossetta-gamiB(DE3) | 第38-39页 |
4.2.3 融合蛋白的原核表达 | 第39页 |
4.2.4 SDS-PAGE电泳检测 | 第39页 |
4.2.5 大量诱导 | 第39页 |
4.2.6 融合蛋白的纯化—镍琼脂糖亲和层析 | 第39-40页 |
4.2.7 纯化后融合蛋白分析 | 第40页 |
4.2.8 拟南芥总蛋白的提取 | 第40页 |
4.2.9 His pull-down筛选ThTrx5互作蛋白 | 第40页 |
4.2.10 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定互作蛋白 | 第40-41页 |
4.2.11 质谱分析 | 第41页 |
4.3 结果与分析 | 第41-42页 |
4.3.1 重组质粒pET41a-Trx5双酶切鉴定结果 | 第41页 |
4.3.2 融合蛋白的原核表达及定位 | 第41-42页 |
4.3.7 质谱分析 | 第42页 |
4.4 本章小结 | 第42-45页 |
5 盐胁迫下转基因与非转基因拟南芥转录组分析 | 第45-58页 |
5.1 材料 | 第45页 |
5.2 方法 | 第45-49页 |
5.2.1 RNA提取 | 第45页 |
5.2.2 提取的RNA质量检测 | 第45页 |
5.2.3 cDNA文库构建和测序 | 第45-46页 |
5.2.4 Solexa数字基因表达谱的生物信息学分析 | 第46-49页 |
5.3 结果与分析 | 第49-57页 |
5.3.1 RNA提取质量检测 | 第49页 |
5.3.2 测序质量评估 | 第49-50页 |
5.3.5 差异表达基因的GO功能分析 | 第50-52页 |
5.3.6 差异表达基因中高丰度表达分析 | 第52-55页 |
5.3.7 盐胁迫应答相关基因分析 | 第55-57页 |
5.4 本章小结 | 第57-58页 |
结论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-71页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
致谢 | 第72-73页 |