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NDV广西分离株分离鉴定、基因序列分析及qRT-PCR检测方法的建立

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NDV广西分离株分离鉴定、基因序列分析及qRT-PCR检测方法的建立
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
缩略词第12-13页
第一章 文献综述第13-23页
    1.1 NDV简述第13页
    1.2 NDV的分子生物学第13-19页
        1.2.1 病毒的分类和形态第13-14页
        1.2.2 理化特性第14页
        1.2.3 生物学活性第14-15页
        1.2.4 培养特性第15页
        1.2.5 NDV的基因组第15-16页
        1.2.6 编码蛋白及其功能第16-19页
    1.3 NDV的基因分型与分子流行病学第19-20页
    1.4 NDV致病机制研究进展第20-21页
    1.5 实时荧光定量PCR技术概况及其在NDV检测中的应用第21-22页
    1.6 研究目的和意义第22-23页
第二章 新城疫病毒广西分离株的分离、鉴定及遗传进化分析第23-36页
    2.1 材料第23-24页
        2.1.1 分离株来源及其背景第23页
        2.1.2 试验材料与试剂第23-24页
        2.1.3 主要仪器设备第24页
    2.2 方法第24-27页
        2.2.1 病毒的分离第24页
        2.2.2 分离株的RT-PCR鉴定与强弱毒分型第24-26页
        2.2.3 常见禽源病毒的排除试验第26页
        2.2.4 分离株的毒力测定第26页
        2.2.5 动物回归试验第26-27页
        2.2.6 分离株的F基因前段序列测定与分析第27页
    2.3 结果第27-34页
        2.3.1 病毒的分离鉴定结果第27页
        2.3.2 NDV RT-PCR鉴别诊断结果第27页
        2.3.3 分离株RT-PCR强弱毒鉴定结果第27-28页
        2.3.4 常见禽源病毒的排除试验结果第28页
        2.3.5 毒力测定结果第28-29页
        2.3.6 动物回归试验结果第29-30页
        2.3.7 分离株F基因前段序列的测定与分析结果第30-34页
    2.4 讨论第34-36页
第三章 两株新城疫病毒广西分离株的病毒纯化及全基因组序列测定与分析第36-55页
    3.1 材料第37-40页
        3.1.1 毒株、鸡胚及细胞第37页
        3.1.2 主要试剂第37页
        3.1.3 主要仪器设备第37页
        3.1.4 引物第37-39页
        3.1.5 序列分析所使用的数据第39-40页
    3.2 方法第40-41页
        3.2.1 病毒的增殖第40页
        3.2.2 病毒的纯化第40页
        3.2.3 蚀斑纯化株RNA的提取及RT-PCR第40页
        3.2.4 PCR产物纯化、基因克隆与测序第40页
        3.2.5 测序结果的拼接与分析第40-41页
        3.2.6 全基因组序列的核苷酸同源性分析第41页
        3.2.7 3'端Leader序列和5'端Trailer序列同源性分析第41页
        3.2.8 全基因组序列的遗传进化分析第41页
        3.2.9 结构蛋白基因的遗传进化分析第41页
    3.3 结果第41-53页
        3.3.1 病毒蚀斑纯化结果第41-43页
        3.3.2 纯化株F基因部分片段扩增与序列比对分析结果第43-44页
        3.3.3 纯化株GXC110083和GXGF12001全长基因RT-PCR扩增结果第44-45页
        3.3.4 纯化株GXC110083和GXGF12001全基因序列的特征第45-46页
        3.3.5 全基因组核苷酸序列同源性分析结果第46-47页
        3.3.6 3'端Leader序列和5'端Trailer序列同源性分析结果第47-49页
        3.3.7 全基因组序列的遗传进化分析结果第49页
        3.3.8 结构蛋白基因的遗传进化分析结果第49-53页
    3.4 讨论第53-55页
第四章 新城疫病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立第55-64页
    4.1 材料第55-56页
        4.1.1 病毒和试验鸡第55-56页
        4.1.2 主要试剂第56页
        4.1.3 主要仪器第56页
        4.1.4 引物的设计与合成第56页
    4.2 方法第56-58页
        4.2.1 病毒RNA的提取和cDNA的合成第56页
        4.2.2 M基因片段的扩增第56-57页
        4.2.3 PCR产物纯化、基因克隆与测序第57页
        4.2.4 质粒标准品的制备第57页
        4.2.5 实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立第57-58页
        4.2.6 实时荧光定量RT-PCR方法的初步应用第58页
    4.3 结果第58-62页
        4.3.1 阳性质粒标准品的制备第58-59页
        4.3.2 标准曲线的建立及扩增效率分析第59页
        4.3.3 敏感性试验结果第59-60页
        4.3.4 重复性试验结果第60页
        4.3.5 特异性试验结果第60-61页
        4.3.6 实时荧光定量RT-PCR方法的初步应用结果第61-62页
    4.4 讨论第62-64页
第五章 结论第61-65页
参考文献第65-69页
附录第69-71页
致谢第71-72页
攻读学位期间发表的学术论文及参与的科研项目第72页

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