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玉米1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基的叶绿体转运肽的克隆和功能分析

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玉米1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基的叶绿体转运肽的克隆和功能分析
论文目录
 
摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
第一章 文献综述第12-30页
    1 叶绿体第12-13页
        1.1 叶绿体的功能和结构第12页
        1.2 叶绿体蛋白第12-13页
    2 叶绿体转运肽的发现及其研究进展第13-23页
        2.1 叶绿体转运肽的发现第13-14页
        2.2 叶绿体转运肽的特点第14-15页
        2.3 叶绿体转运肽的结构域和重要基序第15-17页
            2.3.1 叶绿体转运肽的三个结构域第15页
            2.3.2 叶绿体转运肽中的重要基序第15-17页
        2.4 叶绿体转运肽跨膜的分子机制第17-23页
            2.4.1 叶绿体蛋白进入叶绿体的途径第17-18页
            2.4.2 TOC-TIC途径第18-22页
                2.4.2.1 前体蛋白的分子伴侣第19-20页
                2.4.2.2 前体蛋白在叶绿体外膜上的运输第20-21页
                2.4.2.3 前体蛋白在叶绿体内膜上的运输第21-22页
            2.4.3 蛋白跨类囊体膜运输第22-23页
    3 植物叶绿体生物反应器研究进展第23-25页
        3.1 植物叶绿体表达系统优越性第23-24页
            3.1.1 外源基因高水平表达第23页
            3.1.2 外源基因的定点整合和无位置效应第23-24页
            3.1.3 异源基因的原核表达形式第24页
            3.1.4 安全性好第24页
            3.1.5 易于遗传操作第24页
        3.2 叶绿体作生物反应器在生产上的应用第24-25页
            3.2.1 生产疫苗抗原第24页
            3.2.2 生产药用蛋白第24-25页
    4 叶绿体转运肽的功能研究方法第25-28页
        4.1 生物信息学分析法第25-26页
        4.2 实验分析法第26-28页
            4.2.1 瞬时表达分析法第26-27页
                4.2.1.1 PEG介导法第26-27页
                4.2.1.2 基因枪法第27页
                4.2.1.3 农杆菌介导法第27页
            4.2.2 突变分析法第27-28页
    5 本研究的目的和意义第28-29页
    6 技术路线第29-30页
第二章 研究报告第30-62页
    1 材料和方法第30-47页
        1.1 实验材料第30-31页
            1.1.1 植物材料第30页
            1.1.2 质粒载体及菌株第30页
            1.1.3 酶和试剂盒第30页
            1.1.4 细菌培养基第30-31页
        1.2 实验方法第31-47页
            1.2.1 RbcS cTP的序列预测第31页
            1.2.2 引物设计第31-34页
            1.2.3 幼苗培养第34-35页
                1.2.3.1 玉米幼苗培养第35页
                1.2.3.2 拟南芥幼苗培养第35页
                1.2.3.3 水稻幼苗培养第35页
            1.2.4 基因组DNA提取第35-36页
            1.2.5 RbcS cTP基因克隆的PCR反应第36页
            1.2.6 PCR扩增产物的回收第36-37页
            1.2.7 胶回收产物与T载体连接第37页
            1.2.8 连接产物热击转化(无菌环境操作)第37页
            1.2.9 含有目的片段的单克隆的鉴定及测序第37-38页
            1.2.10 瞬时表达载体的构建第38-43页
                1.2.10.1 质粒提取第38-39页
                1.2.10.2 RbcS cTP瞬时表达载体第39-41页
                1.2.10.3 瞬时表达载体线性化第41-42页
                1.2.10.4 PCR产物和酶切产物胶回收第42页
                1.2.10.5 PCR产物与pJIT163-hGFP瞬时表达载体进行连接第42页
                1.2.10.6 连接产物热击转化第42页
                1.2.10.7 菌液PCR鉴定阳性克隆及测序第42-43页
            1.2.11 基因枪介导的瞬时表达第43-44页
            1.2.12 原生质体制备与转化第44-46页
                1.2.12.1 溶液配方第44页
                1.2.12.2 原生质体提取第44-45页
                1.2.12.3 原生质体转化第45页
                1.2.12.4 原生质体总蛋白提取第45-46页
            1.2.13 Western Blot检测第46-47页
    2 结果与分析第47-59页
        2.1 玉米RbcS cTP序列特征分析第47-52页
        2.2 玉米和拟南芥的RbcS cTP在叶绿体靶向上的功能差异第52-54页
        2.3 RbcS cTP的N-端结构域在叶绿体靶向中起着十分重要的作用第54-59页
    3 讨论第59-62页
全文结论第62-64页
参考文献第64-76页
致谢第76页

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