论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一部分 研究背景 | 第13-39页 |
| 第一章 α-抗胰蛋白酶与SERPINA1基因 | 第13-15页 |
| 第二章 α-抗胰蛋白酶缺乏症概述 | 第15-31页 |
| 1.2.1 α1-抗胰蛋白酶缺乏症的发现 | 第15页 |
| 1.2.2 α1-抗胰蛋白酶缺乏症的致病机制与类型 | 第15-19页 |
| 1.2.3 α1-抗胰蛋白酶缺乏症对的临床症状 | 第19-26页 |
| 1.2.4 α1-抗胰蛋白酶缺乏症的流行病学特征 | 第26-27页 |
| 1.2.5 α1-抗胰蛋白酶缺乏症的诊断与筛查 | 第27-29页 |
| 1.2.6 α1-抗胰蛋白酶缺乏症的预防和治疗 | 第29-31页 |
| 第三章 CRISPR/cas9技术概述 | 第31-39页 |
| 1.3.1 CRISPR/cas9技术的发现与发展 | 第31-32页 |
| 1.3.2 CRISPR/cas9技术的应用 | 第32-34页 |
| 1.3.3 Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型CRISPR的作用机制 | 第34-36页 |
| 1.3.4 Ⅱ型CRISPR/cas9系统概述 | 第36-39页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第39-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-43页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第39页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 2.1.4 实验耗材 | 第40页 |
| 2.1.5 实验试剂配方 | 第40-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-55页 |
| 2.2.1 细胞、血液和组织DNA的提取 | 第43-45页 |
| 2.2.2 组织RNA的提取 | 第45页 |
| 2.2.3 RNA体外反转录 | 第45-46页 |
| 2.2.4 体外转录RNA | 第46页 |
| 2.2.5 E.coli中提取质粒 | 第46-48页 |
| 2.2.6 苏木精-伊红(H&E)染色 | 第48页 |
| 2.2.7 免疫组化染色 | 第48-49页 |
| 2.2.8 天狼星红(Sirius red)染色 | 第49-50页 |
| 2.2.9 D-PAS染色 | 第50-51页 |
| 2.2.10 免疫荧光染色 | 第51页 |
| 2.2.11 实时荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 2.2.12 细胞和组织蛋白质的提取 | 第52-53页 |
| 2.2.13 BCA定量 | 第53-54页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第54-55页 |
| 2.2.15 大鼠胚胎显微注射 | 第55页 |
| 2.3 记录与分析软件 | 第55-57页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第57-77页 |
| 第一章 利用CRISPR/Cas9技术构建Pizz点突变大鼠 | 第57-61页 |
| 3.1.1 引言 | 第57页 |
| 3.1.2 SERPINA序列保守型分析 | 第57-58页 |
| 3.1.3 同源oligo设计 | 第58页 |
| 3.1.4 显微注射 | 第58页 |
| 3.1.5 Founder大鼠基因型鉴定 | 第58-59页 |
| 3.1.6 用于构建F0代大鼠的sgRNA的off-target检测 | 第59-61页 |
| 3.1.7 小结 | 第61页 |
| 第二章 PiZZ大鼠体内α-抗胰蛋白酶表达水平检测 | 第61-65页 |
| 3.2.1 血清中α-抗胰蛋白酶含量降低 | 第61-62页 |
| 3.2.2 肺组织中α-抗胰蛋白酶含量降低 | 第62-63页 |
| 3.2.3 肝组织中α-抗胰蛋白酶含量增加 | 第63-65页 |
| 3.2.4 小结 | 第65页 |
| 第三章 Z型突变α-抗胰蛋白酶在Pi ZZ大鼠体内堆积 | 第65-69页 |
| 3.3.1 D-PAS染色检测Pi ZZ大鼠肝脏中α-抗胰蛋白酶的堆积 | 第65-67页 |
| 3.3.2 免疫荧光法检测Pi ZZ大鼠肝脏中α-抗胰蛋白酶的堆积 | 第67-68页 |
| 3.3.3 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 α-抗胰蛋白酶含量下降对Pi ZZ大鼠肺生理功能的影响 | 第69-70页 |
| 第五章 Z型突变α-抗胰蛋白酶的累积对Pizz大鼠肝脏生理功能的影响 | 第70-77页 |
| 3.5.1 生化指标检测结果指示Pi ZZ大鼠肝功能受到一定程度损伤 | 第71-73页 |
| 3.5.2 Sirius red染色结果表明Pi ZZ大鼠肝脏出现纤维化 | 第73-74页 |
| 3.5.3 PAS糖原染色结果证实Pi ZZ大鼠肝脏糖原贮存能力下降 | 第74-75页 |
| 3.5.4 组织切片H&E染色结果表明Pi ZZ大鼠肝脏组织中存在异常的病理结构 | 第75-76页 |
| 3.5.5 小结 | 第71-77页 |
| 第四部分 结语 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 科研成果 | 第87页 |
