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基于无滋养层细胞无动物源性蛋白诱导体系的类人精原干细胞的分离纯化与鉴定

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基于无滋养层细胞无动物源性蛋白诱导体系的类人精原干细胞的分离纯化与鉴定
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7页
1 文献综述第11-28页
    1.1 干细胞简介第11-15页
        1.1.1 干细胞的定义与分类第11页
        1.1.2 干细胞的发展历程第11-13页
        1.1.3 干细胞的应用及前景第13-15页
    1.2 干细胞与生殖细胞第15-20页
        1.2.1 生殖细胞的发育第15-17页
        1.2.2 体外诱导生殖细胞第17-19页
        1.2.3 CRISPR/Cas9技术简介第19-20页
    1.3 精原干细胞研究进展第20-28页
        1.3.1 精原干细胞简介第20-22页
        1.3.2 精原干细胞的调控第22-25页
        1.3.3 精原干细胞的鉴定第25-28页
2 材料与方法第28-50页
    2.1 实验材料第28-35页
        2.1.1 生物材料第28-29页
        2.1.2 仪器耗材第29-30页
        2.1.3 实验试剂:第30-33页
        2.1.4 引物序列第33-35页
    2.2 实验方法第35-50页
        2.2.1 细胞培养与分化第35-37页
        2.2.2 NANOS3敲除细胞系的建立第37-38页
        2.2.3 流式细胞术第38-40页
        2.2.4 RNA的抽提,反转与cDNA检测第40-42页
        2.2.5 DNA的抽提第42-43页
        2.2.6 分子克隆技术第43-44页
        2.2.7 原位荧光杂交第44-45页
        2.2.8 类人精原干细胞的体内移植第45-46页
        2.2.9 石蜡切片相关第46-47页
        2.2.10 免疫荧光第47-50页
3. 实验结果与分析第50-69页
    3.1 拟胚体形式诱导生殖细胞第50-57页
        3.1.1 分化前后形态比较第51-52页
        3.1.2 PLZF阳性群体的产生第52-53页
        3.1.3 基因转录水平第53-54页
        3.1.4 生殖相关蛋白表达第54页
        3.1.5 单倍体形成第54-55页
        3.1.6 体内移植后的功能鉴定第55-57页
    3.2 NANOS3对类人精原干细胞的形成至关重要第57-60页
        3.2.1 NANOS3敲除细胞系的建立第57-59页
        3.2.2 NANOS3敲除后的诱导分化第59-60页
    3.3 类人精原干细胞分离纯化与鉴定第60-69页
        3.3.1 类人精原干细胞表面标志的筛选第61-64页
        3.3.2 类人精原干细胞标志基因的转录第64-66页
        3.3.3 类人精原干细胞体内移植后检测第66-69页
4 总结与讨论第69-75页
    4.1 对体外分化体系的重复与完善第69-70页
        4.1.1 分化体系确实可以诱导产生功能性生殖细胞第69页
        4.1.2 NANOS3对于类人精原干细胞的形成具有重要作用第69-70页
    4.2 多能干细胞来源的类精原干细胞的分离策略总结第70-72页
        4.2.1 表面抗原的筛选第70-71页
        4.2.2 分离纯化后的鉴定第71-72页
    4.3 讨论第72-75页
参考文献第75-85页

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