论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 合成生物学概况 | 第12-16页 |
| 1.1 合成生物学的发展 | 第12-14页 |
| 1.2 合成生物学的运用 | 第14-16页 |
| 2 光遗传学相关概况 | 第16-18页 |
| 2.1 光遗传学技术 | 第16-17页 |
| 2.2 光调控基因表达系统 | 第17-18页 |
| 3 基因编辑技术概况 | 第18-19页 |
| 4 CRISPR/Cas9技术概况 | 第19-21页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9系统 | 第19-21页 |
| 4.2 CRISP/dCas9系统 | 第21页 |
| 5 诱导型CRISPR/Cas9系统概况 | 第21-27页 |
| 5.1 通过化学方法诱导的CRISPR/Cas9系统 | 第22-24页 |
| 5.2 通过光诱导的CRISPR/Cas9系统 | 第24-27页 |
| 6 CRISPR/Cas9系统与表观遗传学 | 第27-30页 |
| 6.1 表观遗传学简介 | 第27-28页 |
| 6.2 CRISPR/Cas9系统在表观遗传学上的运用 | 第28-30页 |
| 第二章 远红外光控CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建与优化 | 第30-62页 |
| 1 引言 | 第30-31页 |
| 2 材料与试剂 | 第31-36页 |
| 2.1 实验细胞 | 第31页 |
| 2.2 主要实验试剂 | 第31-33页 |
| 2.3 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第34-36页 |
| 3 实验方法 | 第36-44页 |
| 3.1 光源的选择与制作 | 第36-37页 |
| 3.2 引物的设计与合成 | 第37页 |
| 3.3 重组质粒的制备 | 第37-41页 |
| 3.4 细胞培养与转染 | 第41-43页 |
| 3.5 光照处理 | 第43页 |
| 3.6 报告基因分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的检测 | 第43-44页 |
| 3.7 细胞成像 | 第44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-60页 |
| 4.1 远红外光控CRISPR/Cas9基因编辑系统的设计 | 第44-47页 |
| 4.2 远红外光控CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建 | 第47-50页 |
| 4.3 远红外光控CRISPR/Cas9基因编辑系统的优化 | 第50-60页 |
| 5 讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 远红外光控基因CRISPR/Cas9编辑系统的动力学表征 | 第62-74页 |
| 1 引言 | 第62页 |
| 2 材料与试剂 | 第62页 |
| 3 实验方法 | 第62-63页 |
| 3.1 细胞基因组DNA提取 | 第62页 |
| 3.2 错配酶T7E1法检测内源基因的突变 | 第62-63页 |
| 4 结果与分析 | 第63-72页 |
| 4.1 外源基因的编辑 | 第63-67页 |
| 4.2 内源基因的编辑 | 第67-72页 |
| 5 讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 远红外光控CRISPR/dCas9系统的动力学表征 | 第74-89页 |
| 1 引言 | 第74页 |
| 2 材料与试剂 | 第74页 |
| 2.1 实验细胞 | 第74页 |
| 3 实验方法 | 第74-76页 |
| 3.1 RNA的提取 | 第74页 |
| 3.2 反转录PCR | 第74-75页 |
| 3.3 实时定量PCR (Real-time Quantitative PCR) | 第75-76页 |
| 4 结果与分析 | 第76-87页 |
| 4.1 外源基因的激活 | 第76-80页 |
| 4.2 内源基因的激活 | 第80-87页 |
| 5 讨论 | 第87-89页 |
| 第五章 远红外光控CRISPR/dCas9系统在表观遗传学方面的运用 | 第89-98页 |
| 1 引言 | 第89-90页 |
| 2 材料与试剂 | 第90页 |
| 3 实验方法 | 第90页 |
| 4 结果与分析 | 第90-96页 |
| 4.1 远红外光控表观遗传CRISPR/dCas9系统的设计与建立 | 第90-92页 |
| 4.2 远红外光控表观遗传CRISPR/dCas9系统的优化 | 第92-95页 |
| 4.3 远红外光控表观遗传CRISPR/dCas9系统激活不同的甲基化基因 | 第95-96页 |
| 5 讨论 | 第96-98页 |
| 总结 | 第91-100页 |
| 参考文献 | 第100-105页 |
| 附录 | 第105-117页 |
| 附录1:实验中涉及的引物、质粒具体信息以及质粒构建方法 | 第105-116页 |
| 附录2:缩略词表 | 第116-117页 |
| 在学期间取得的科研成果 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
