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基于CRISPR/cas9的BRAF V600E突变质控品研究

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基于CRISPR/cas9的BRAF V600E突变质控品研究
论文目录
 
中文摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
  1. 前言第9-12页
  2. 材料和方法第12-29页
  2.1 实验材料及试剂第12-17页
  2.2 实验方法第17-29页
    2.2.1 细胞系的选择及突变点位置确定第17-18页
    2.2.2 sgRNA及HR模板设计第18-19页
    2.2.3 pSpCas9(BB)-2A-GFP(PX458)质粒验证第19-20页
    2.2.4 sgRNA与PX458质粒连接第20-22页
    2.2.5 sgRNA-PX458质粒转染HEK293T细胞第22-23页
    2.2.6 T7EI酶切分析第23-24页
    2.2.7 混合池BRAF V600E突变检测第24-25页
    2.2.8 混合池细胞流式分选、单克隆培养第25页
    2.2.9 单克隆细胞BRAF V600E突变检测第25-29页
  3. 结果第29-36页
  3.1 pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒单、双酶切验证第29页
  3.2 sgRNA-pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒测序第29-30页
  3.3 重组质粒转染HEK293T细胞显微镜下图片第30-32页
  3.4 T7EI酶切分析第32-33页
  3.5 混合池BRAF V600E突变检测第33-34页
  3.6 单克隆细胞BRAF V600E突变筛选第34-35页
    3.7. Sanger测序结果第35-36页
  4. 讨论第36-40页
  5. 结论第40-41页
参考文献第41-44页
综述第44-55页
参考文献第52-55页
附录一第55-56页
附录二第56-57页
致谢第57-58页

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