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利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼asb5a基因敲除品系
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利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼asb5a基因敲除品系
论文目录
摘要
第1-5页
ABSTRACT
第5-9页
1. 引言和文献综述
第9-22页
1.1 基因编辑技术在斑马鱼中的应用
第9-14页
1.1.1 斑马鱼中常见的基因编辑技术
第9页
1.1.2 诱变技术
第9-10页
1.1.3 Tol2转座子、Morpholino干扰技术
第10-11页
1.1.4 ZFNs、TALENs简介
第11-14页
1.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术
第14-17页
1.2.1 CRISPR/Cas9简介
第14-16页
1.2.2 CRISPR/Cas9的优势
第16页
1.2.3 CRISPR/Cas9存在的问题
第16-17页
1.3 斑马鱼作为模式动物的优势
第17页
1.4 asb5a基因的介绍
第17-20页
1.5 本文研究的意义
第20-22页
2. 材料和方法
第22-35页
2.1 材料
第22-26页
2.1.1 主要试剂
第22-23页
2.1.2 主要实验仪器
第23-24页
2.1.3 主要所需溶液配方
第24页
2.1.4 斑马鱼品系
第24-25页
2.1.5 主要质粒和菌株
第25页
2.1.6 生物信息学分析主要数据库
第25-26页
2.2 实验方法
第26-35页
2.2.1 asb5a基因打靶位点的选择和确认
第26-27页
2.2.2 PCR引物的设计
第27-28页
2.2.3 gRNA表达载体的构建与合成
第28-32页
2.2.4 F0代突变鱼的制备
第32-33页
2.2.5 F0代突变体的筛选
第33-35页
3. 结果
第35-44页
3.1 gRNA靶位点的确定及打靶载体的构建
第35-38页
3.1.1 针对斑马鱼asb5a基因的打靶位点分析
第35-37页
3.1.2 sgRNA的制备
第37-38页
3.2 asb5a-F0代的鉴定分析
第38-44页
3.2.1 注射后胚胎有效性分析
第38-39页
3.2.2 F0代成鱼鉴定分析
第39-44页
4. 结论
第44-45页
5. 分析与讨论
第45-47页
参考文献
第47-52页
附录一
第52-53页
附录二
第53-54页
致谢
第54-55页
本篇论文共
55
页,
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